[发明专利]一种生殖支原体核酸实时荧光PCR检测引物、探针及试剂盒

说明书

本发明公开了一种生殖支原体核酸实时荧光PCR检测引物、探针及试剂盒，该试剂盒包括扩增反应液、生殖支原体核酸检测液、阳性对照品和阴性对照品；所述生殖支原体核酸检测液包括针对生殖支原体、人类RNase P基因的特异性引物及探针，针对生殖支原体的引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，针对生殖支原体的探针序列如SEQ ID NO.3所示。本发明提供的生殖支原体实时荧光PCR检测的引物、探针及试剂盒，能够快速、准确且灵敏地检测出生殖支原体，实验结果重复性好，精密度高，检测时间周期短，最快能在70分钟内完成检测，极大的节约了检测时间，能加快临床诊断效率。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体来说，涉及一种生殖支原体核酸实时荧光PCR检测引物、探针及试剂盒。

背景技术

生殖支原体(Mycoplasma genitalium,MG)属于柔膜体纲，支原体目，支原体科，其基因组大小为580kb，是已知最小的能自我复制的细菌，无细胞壁，革兰氏阴性。MG是引起性传播疾病的病原体之一，在男性引起非淋菌性尿道炎(Non-gonococcal urethritis,NGU)，在女性中引起宫颈炎、子宫内膜炎及盆腔炎等，可导致异位妊娠、不孕等不良结局，且生殖支原体的感染可能促进HIV病毒的传播与发展。生殖支原体有很重要的临床意义。

《2018年英国生殖支原体感染处理指南》中指出：一般人群中MG感染率为1-2％，女性略高于男性，在男性NGU患者中，MG感染率高达10-35％，在持续性复发性尿道炎患者中，MG检出率高达40％。在我国，NGU发病率呈逐年升高的趋势，而MG感染是NGU的主要病原体之一，在NGU患者中9-25％可查出MG阳性，在沙眼衣原体阴性的NGU患者中，MG检查出概率高达20-35％。目前，MG已成为重要的性传播病原体之一。

建立早期、快速、准确的检测生殖支原体感染的方法具有重要意义。MG具有苛刻的营养需求，生长极其缓慢，因此尽管培养法是诊断病原微生物的金标准，但培养方法并不适合MG临床诊断。2016年《生殖道支原体感染诊治专家共识》中指出：在血清学方面，生殖支原体与肺炎支原体有很多交叉反应的抗原决定簇，虽然各种血清学检验方法如凝集反应，补体结合等可用来检测生殖支原体的血清学变化，但由于肺炎支原体在泌尿生殖道中可能出现，检测MG会出现假阳性，临床工作中并没有实用性。《2018年英国生殖支原体感染处理指南》指出，在临床标本中采用核酸扩增试验检验MG特异性DNA或RNA是目前唯一的检测方法。目前国内基于PCR技术检测生殖支原体的试剂盒较少，自动化程度不高，假阴性较高，因此，开发一种灵敏度高，检测时间短，假阴性低，快捷简便的试剂盒是临床急需解决的问题。

发明内容

针对相关技术中的上述技术问题，本发明提出一种用于生殖支原体核酸荧光定量PCR检测的引物、探针和试剂盒，能够克服现有技术的上述不足。

为实现上述技术目的，本发明的技术方案是这样实现的：

一种生殖支原体核酸实时荧光PCR检测引物及探针，所述引物的序列如SEQ IDNO.1和SEQ ID NO.2所示，所述探针的序列如SEQ ID NO.3所示。

进一步地，所述探针的序列3’端标记QSY。

根据本发明的另一方面，提供了一种生殖支原体核酸实时荧光PCR检测试剂盒，包括扩增反应液、生殖支原体核酸检测液、阳性对照品和阴性对照品；所述生殖支原体核酸检测液包括针对生殖支原体、人类RNAse P基因的特异性引物及探针，针对生殖支原体的引物序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，针对生殖支原体的探针序列如SEQ ID NO.3所示。

进一步地，针对人类RNAse P基因的引物序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示，针对人类RNAse P基因的探针序列如SEQ ID NO.6所示。

进一步地，所述扩增反应液包括taq DNA聚合酶、4种dNTP及PCR扩增反应液所需离子。