[发明专利]检测H7亚型高低致病性禽流感病毒的特异性引物和探针及试剂盒在审
| 申请号： | 202110579961.2 | 申请日： | 2021-05-26 |
| 公开（公告）号： | CN114085923A | 公开（公告）日： | 2022-02-25 |
| 发明（设计）人： | 娄亚坤;赵林萍;付燕峰;杨楠;杨丹芳;马彩燕;常伟;李慧英;任宝红 | 申请（专利权）人： | 郑州中道生物技术有限公司;河南国昌生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 郑州豫乾知识产权代理事务所(普通合伙) 41161 | 代理人： | 李保平 |
| 地址： | 450000 河南省郑州市市辖区高新技术产业开发区长椿*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 h7 高低 致病性 禽流感 病毒 特异性 引物 探针 试剂盒 | ||
1.检测H7亚型高低致病性禽流感病毒的特异性引物和探针，其特征在于，所述特异性引物为H7-F和H7-R，
H7-F的序列信息：5’-GRAAATGTCCRAGATATGTTA-3’，
H7-R的序列信息：5’-ATTAGKCCTTCCCATCCATT-3’；
探针为H7-M和H7-W，
H7-M的序列信息：5′-AAACGGATTGCGA-3′，
H7-W的序列信息：5′-TGGTGCYATAGCDGGTTTCATTG-3′。
2.如权利要求1所述的检测H7亚型高低致病性禽流感病毒的特异性引物和探针，其特征在于，H7-M的5′端进行报告荧光染料FAM标记，3′端进行荧光淬灭基团MGB标记，H7-W的5′端进行报告荧光染料VIC标记，3′端进行荧光淬灭基团BHQ1标记。
3.检测H7亚型高低致病性禽流感病毒的双重荧光RT-PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求2所述的特异性引物和探针。
4.如权利要求3所述的检测H7亚型高低致病性禽流感病毒的双重荧光RT-PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括反转录试剂、扩增试剂、ddH2O、模板。
5.如权利要求4所述的检测H7亚型高低致病性禽流感病毒的双重荧光RT-PCR试剂盒，其特征在于，引物H7-F和H7-R浓度均为50μM，探针H7-M和H7-W浓度均为20μM。
6.如权利要求5所述的检测H7亚型高低致病性禽流感病毒的双重荧光RT-PCR试剂盒，其特征在于，试剂盒包括反转录试剂0.2-0.4μL、扩增试剂8-10μL、特异性引物：50μM H7-F和H7-R各0.1-0.3μL、探针：20μM H7-M和H7-W各0.3-0.5μL，模板1-3μL，加入ddH2O至20μL，模板为阳性对照、阴性对照中的一种或两种。
7.如权利要求6所述的检测H7亚型高低致病性禽流感病毒的双重荧光RT-PCR试剂盒，其特征在于，反转录试剂为E-Mix，扩增试剂为2×Hieff Unicon® TaqMan mulitiplexqPCR master mix。
8.如权利要求7所述的检测H7亚型高低致病性禽流感病毒的双重荧光RT-PCR试剂盒，其特征在于，试剂盒的荧光RT-PCR反应扩增条件：第一阶段，反转录：42℃，15 min；第二阶段，预变性：95℃，30s；第三阶段，PCR扩增：94℃，10s； 60℃，20s ，40个循环，每次循环第三阶段60℃扩增后采集荧光信号，选择荧光通道FAM和VIC。
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