[发明专利]一种植物叶片基因组DNA快速提取方法

说明书

本发明公开了一种植物叶片基因组DNA快速提取方法。本发明所提供的提取植物叶片基因组DNA的方法包括：将植物叶片置于液氮中预冷，用组织研磨杵捣碎叶片组织；加入提取缓冲液，95‑100℃加热裂解植物细胞，离心后上清液为植物叶片基因组DNA粗提液；所述提取缓冲液为pH 7.0‑8.0的10‑20mM Tris‑HCl。本发明操作简单，大幅减少了提取实验所用的时间，适用于大量植物叶片样品的基因组DNA提取。更重要的是，本发明所用试剂成本低廉，容易配制；且无需有毒有害试剂，对操作人员和操作环境安全无毒。本发明的方法适用性广，能应用于多种植物。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种植物叶片基因组DNA快速提取方法。

背景技术

基因组DNA是生物遗传信息的载体。以基因组DNA为模板，通过PCR扩增获取基因组DNA信息是研究基因结构和功能的必要步骤。目前，实验室常用的植物基因组DNA提取方法主要有三种：SDS提取法、CTAB提取法和高盐低pH提取法。这三种方法操作繁琐，提取过程中需使用SDS、CTAB、β-巯基乙醇、三氯甲烷、异戊醇、异丙醇等有毒有害的试剂。

市场上常见的植物基因组DNA提取试剂盒，一般利用膜吸附柱或磁珠分离基因组DNA。虽然试剂盒法在一定程度上简化了操作步骤，但仍然略显繁琐，更适用于少量样本的植物基因组DNA提取，无法满足大量样本的基因组提取实验。此外，试剂盒法虽然减少了有毒有害试剂的使用量，但仍然无法完全避免使用这些试剂。

发明内容

为了有效解决上述技术问题，本发明旨在提供一种简单、无毒、高效，且对实验室设备条件要求不高的快速提取植物基因组DNA的方法。第一方面，本发明要求保护一种提取植物叶片基因组DNA的方法。

本发明所要求保护的提取植物叶片基因组DNA的方法，可包括如下步骤：

(A)将植物叶片置于液氮中预冷，用组织研磨杵捣碎叶片组织；

(B)向步骤(A)处理后的样品中加入提取缓冲液，95-100℃(如100℃)加热裂解植物细胞，离心后上清液为植物叶片基因组DNA粗提液；

所述提取缓冲液为pH 7.0-8.0的10-20mM Tris-HCl(如pH 8.0的20mM Tris-HCl)。

在步骤(A)中，所述预冷的时间应至少为10秒(如10秒)。

在本发明的具体实施方式中，步骤(A)具体为：取50-100mg植物叶片，置于1.5mL离心管中，再取一个组织研磨杵放入离心管中，一并浸于液氮中预冷10秒。然后用组织研磨杵捣碎叶片组织10秒，使叶片组织变成粉末状。

在步骤(B)中，所述加热的时间可为5-10分钟(如10分钟)。所述离心可为12000g离心5-10分钟(如5分钟)。

在步骤(B)中，所述提取缓冲液的用量与步骤(A)中所述植物叶片的用量配比可为200μL：50-100mg。

在所述方法中，所述植物叶片可为1月龄叶片或2月龄叶片。

在所述方法中，不使用有毒有害试剂(如SDS、CTAB、三氯甲烷、异戊醇、异丙醇和β-巯基乙醇等)；不使用组织研磨仪。

第二方面，本发明要求保护一种对植物基因组中目的基因进行PCR检测的方法。

本发明要求保护的对植物基因组中目的基因进行PCR检测的方法，可包括如下步骤：

P1、利用前文第一方面中所述的方法制备得到植物叶片基因组DNA粗提液；

P2、直接以植物叶片基因组DNA粗提液为模板，针对目的基因进行PCR扩增。