[发明专利]基于PCR技术的用于检测PAX1基因甲基化的检测试剂盒及其应用

说明书

一种基于PCR技术的用于检测PAX1基因甲基化的检测试剂盒，包括检测引物对和检测探针；所述检测引物对包括用于检测PAX1基因甲基化的扩增引物对和通用引物对，所述扩增引物对的碱基序列如SEQ ID NO.1‑3所示，所述通用引物对的碱基序列如SEQ ID NO.4‑5所示；所述检测探针的5’端标记有荧光基团，所述检测探针的3’端标记有淬灭基团；所述检测探针包括检测PAX1基因的探针，所述探针的碱基序列如SEQ ID NO.6‑7所示。本申请提供一种基于PCR技术的用于检测PAX1基因甲基化的检测试剂盒，具有极高的灵敏度，特异度高。

技术领域

本发明涉及生物医学检测技术，具体涉及一种基于PCR技术的用于检测 PAX1基因甲基化的检测试剂盒及其应用。

背景技术

研究资料表明，宫颈癌的发病率和死亡率正逐年上升，已分别居女性恶性肿瘤发病率和死亡率的第3位和第4位。研究显示，我国宫颈癌每年的新发病例数由2010年的2.85万～13.75万上升为2015年的4.58万～18.85万。2008年，Lai等首次发现PAX1在宫颈癌中出现甲基化异常。其通过甲基化芯片筛选出6 个在宫颈癌组织中甲基化频率较高的基因，即SOX1、PAX1、LMX1A、NKX6-1、 WT1和ONECUT1。与正常对照组组织中PAX1甲基化频率(0％)相比，PAX1基因在宫颈癌组织中甲基化异常频率可高达94.4％(P＜0.0001)。Lim等的研究结果显示，PAX1基因的甲基化水平随着宫颈病变程度的加深而逐渐增加。在正常宫颈组织及低度鳞状上皮内病变(LSIL)中PAX1的甲基化水平是2％，高度鳞状上皮内病变(HSIL)中为41％，鳞状细胞癌(SCC)中是90％。Xu等研究显示，PAX1 在宫颈癌组织中的甲基化阳性率可达87.5％，且随病情的演变呈现明显的上升趋势。上述研究结果提示，PAX1在正常宫颈组织及宫颈病变组织中的甲基化程度存在很大的差异，宫颈病变组织中PAX1甲基化检测可能会成为一种宫颈癌临床诊断的分子标志物。

此前，病理组织学的检查是宫颈病变诊断的“金标准”，利用宫颈刮片行 HPV检测是最常用于筛查宫颈癌的方法。HPV检测具有较高的灵敏度和阴性预测值，然而一直存在较低的特异度和较高的假阳性率缺陷。

发明内容

为了解决上述现有技术中存在的问题，本申请的一目的是提供一种基于 PCR技术的用于检测PAX1基因甲基化的检测试剂盒，具有极高的灵敏度，特异度高。

为了实现上述技术效果，本发明的具体技术方案如下：

一种基于PCR技术的用于检测PAX1基因甲基化的检测试剂盒，包括检测引物对和检测探针；所述检测引物对包括用于检测PAX1基因甲基化的扩增引物对和通用引物对，所述扩增引物对的碱基序列如SEQ ID NO.1-3所示，所述通用引物对的碱基序列如SEQ IDNO.4-5所示；所述检测探针的5’端标记有荧光基团，所述检测探针的3’端标记有淬灭基团；所述检测探针包括检测PAX1基因的探针，所述探针的碱基序列如SEQ ID NO.6-7所示。

进一步地，所述荧光基团为FAM、TET、HEX、CY5、ROX、VIC中的一种。

进一步地，所述淬灭基团为6-TAMRA、BHQ-1～3中的一种。

进一步地，还包括核酸提取液、PCR缓冲液和PCR反应液中的一种或多种。

进一步地，所述PCR反应液为Taq DNA聚合酶、dNTPs和Mg2+的一种或多种。

进一步地，还包括重亚硫酸盐。

本发明还提供上述的基于PCR技术的用于检测PAX1基因甲基化的检测试剂盒在检测宫颈癌中的应用。

依据上述技术方案，本申请提供的检测PAX1基因甲基化情况的检测试剂盒，其具有极高的灵敏度，且其特异度超过目前常用的HPV检测方法的特异度，在临床上筛查和早期诊断宫颈癌中极具应用价值。

具体实施方式