[发明专利]一种重组新城疫病毒基质蛋白及其应用

说明书

本发明提供了一种重组新城疫病毒基质蛋白及其应用，所述重组新城疫病毒基质蛋白为发生了R247K和/或S263R突变的基质蛋白；所述新城疫病毒为新城疫病毒疫苗株La Sota株。本发明还提供了一种核酸分子、一种重组载体、一种重组细胞、一种重组新城疫病毒及其制备方法以及一种新城疫病毒疫苗。所述重组新城疫病毒基质蛋白具有更好的核质穿梭效率、更强的出胞能力及更快的出芽速度，可以促进新城疫病毒的增殖与释放；含有重组基质蛋白的重组新城疫病毒具有更高的滴度和更快的增殖速度，且依然保持弱毒毒力，对于疫苗的研发与改进具有重要的意义。

技术领域

本发明属于重组病毒蛋白技术领域，尤其涉及一种重组新城疫病毒基质蛋白及其应用。

背景技术

新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)是国际兽疫局(OIE)列出的危害全球养禽业的高度接触性、烈性动物传染病病原之一。NDV属于副黏病毒科、正腮腺炎病毒属、禽正腮腺炎病毒I型，是一类有囊膜病毒，基因组由不分节段的单股负链RNA构成，依次编码NP-P-M-F-HN-L多种结构蛋白。

NDV曾经给养禽业造成了严重的经济损失，因此，研发相应的疫苗具有重要的意义。CN106754765A公开了一种新城疫病毒样颗粒、制备方法及其应用，通过将新城疫病毒M蛋白、F蛋白、NP蛋白和HN蛋白自行组装形成空心化结构的蛋白颗粒，可应用于相关疫苗的制备中。然而，该方法制备过程繁琐，对人员的技术水平要求较高，且生产成本较高，限制了相关产品的应用。

目前，应用最为广泛的新城疫病毒疫苗株为LaSota株，可制成弱毒活疫苗或灭活疫苗。新城疫是一种传播能力极强的病原，商品化禽类在生产过程中需要多次免疫，因此对于该疫苗的需求量巨大，而病毒的产量直接决定疫苗的生产数量，与生产成本直接相关。因此，如何在疫苗制备过程中提高病毒的滴度，增加疫苗产量，降低生产成本，已成为亟待解决的问题。

发明内容

针对现有技术的不足和实际需求，本发明提供一种重组新城疫病毒基质蛋白及其应用，通过对La Sota株的基质蛋白进行改造，提高了其出核效率，进而提高VLPs的出芽效率及病毒的增殖效率，含有重组基质蛋白的重组病毒的滴度更高，制备得到的疫苗效价更好。

为达此目的，本发明采用如下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种重组新城疫病毒基质蛋白，所述重组新城疫病毒基质蛋白为发生了R247K和/或S263R突变的基质蛋白；

所述新城疫病毒为新城疫病毒疫苗株La Sota株。

本发明中，基质(Matrix protein，M)蛋白简称M蛋白，基因长度约1.2kb，相对分子量约40kDa，结构较为保守。M蛋白位于病毒囊膜内表面，作为核糖核蛋白复合体与糖蛋白之间的桥梁，在促进子代病毒粒子的组装和出芽过程中起重要作用，同时其依赖于自身携带的出核信号(Nuclear export signal，NES)和入核信号(Nuclear localization signal，NLS)，具有核质穿梭的特点。

本发明中，通过对La Sota株的M蛋白进行R247K和/或S263R的突变改造，显著提高了其核质穿梭的能力，出胞效率更高，进而提高了NDV的VLPs的出芽效率及病毒的增殖效率。含有上述重组M蛋白的重组La Sota株病毒的增殖速度明显加快，病毒滴度显著提高，具有极高的应用价值。

优选地，所述重组新城疫病毒基质蛋白包括SEQ ID No.1～3所示的氨基酸序列中的任意一种。

SEQ ID No.1：KKGKKVTFDKLEKKIRS；

SEQ ID No.2：RKGKKVTFDKLEKKIRR；

SEQ ID No.3：KKGKKVTFDKLEKKIRR。