[发明专利]一种基于细胞线粒体质量评估的T细胞PD-1检测方法有效
| 申请号： | 202110570734.3 | 申请日： | 2021-05-25 |
| 公开（公告）号： | CN113030475B | 公开（公告）日： | 2021-08-10 |
| 发明（设计）人： | 李国平;黄兴琳;李文娟;严崇虎 | 申请（专利权）人： | 泛肽生物科技（浙江）有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/577 | 分类号： | G01N33/577;G01N33/543;G01N33/533;G01N21/64 |
| 代理公司： | 浙江中桓凯通专利代理有限公司 33376 | 代理人： | 李美宝 |
| 地址： | 315000 浙江省宁波市*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 细胞 线粒体 质量 评估 pd 检测 方法 | ||
1.一种基于细胞线粒体质量评估的T细胞PD-1检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S10：获取T细胞；
S20：在所述T细胞中加入荧光标记好的单克隆抗体圈出辅助性T细胞，和/或，细胞毒性T细胞；同时加入荧光标记好的PD-1抗体，得到试样一；
S30：在所述试样一中加入线粒体探针，使用所述线粒体探针作为细胞代谢指标，划分出MT-群和MT+群，得到试样二；
S40：使用流式细胞仪对所述试样二进行检测，获得不同代谢水平下PD-1的表达量；
其中，MT-群为线粒体探针染色后低强度表达群，MT+群为线粒体探针染色后高强度表达群。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于， 所述获取T细胞包括以下步骤：
S11：使用淋巴细胞分离液提取分离人外周血样本，得到PBMC；
S12：在所述PBMC中，加入抗体包被的磁珠微球，在室温下孵育15-30分钟，得到标记好的T细胞；
S13：在所述标记好的T细胞中加入缓冲液进行清洗，然后加入洗脱缓冲液，在25~37℃下孵育10-30分钟；最后使用所述缓冲液清洗得到所述T细胞。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述缓冲液为含有1%FBS的PBS缓冲液。
4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述洗脱缓冲液中含有100-300U/mL的木瓜凝乳蛋白酶。
5.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，10μg所述抗体包被的磁珠微球能够结合500-1000个所述T细胞。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述辅助性T细胞采用的单克隆抗体为CD4，荧光素为PE Cyanine7。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述细胞毒性T细胞采用的单克隆抗体为CD8，荧光素为FITC。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述PD-1抗体的荧光素为PE。
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