[发明专利]一种重组人胶原蛋白肽及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种重组人胶原蛋白肽，其特征在于，所述的重组人胶原蛋白肽全长为1022个氨基酸，其中N端为Ⅰ型人胶原蛋白241-780位肽段共540个氨基酸，C端为Ⅲ型人胶原蛋白1141-1400位肽段和6个His标签共266个氨基酸，中间为Ⅱ型人胶原蛋白244-459位肽段共216个氨基酸进行链接。

2.根据权利要求1所述的人胶原蛋白肽，其特征在于，所述的重组人胶原蛋白肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.一种CHO-K1细胞株，其特征在于，所述的CHO-K1细胞株含有能高效分泌表达重组人胶原蛋白肽的基因，所述的重组人胶原蛋白肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

4.根据权利要求3所述的CHO-K1细胞株，其特征在于，所述的重组人胶原蛋白肽的基因是经过密码子优化后的核苷酸序列；所述的密码子优化后的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

5.一种制备如权利要求3～4任一权利要求所述的CHO-K1细胞株的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)将SEQ ID NO.2所示的基因序列克隆到真核表达载体中，以得到含有重组人胶原蛋白肽编码基因的重组质粒；

2)再将所述重组质粒转染至CHO-K1细胞中，以得到CHO-K1细胞株；

3)通过培养、筛选、驯化步骤2)中所述CHO-K1细胞株，以得到高效分泌表达重组人胶原蛋白肽的细胞株。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的真核表达载体为pEE12.4。

7.一种使用如权利要求3～4任一权利要求所述的CHO-K1细胞株制备重组人胶原蛋白肽的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)将培养基CD-CHO和培养基Ex-cell 302混合，以得到混合培养基，其中，培养基CD-CHO和培养基Ex-cell 302的体积比为6:4；以及

2)将如权利要求3～4任一权利要求所述的CHO-K1细胞株在所述混合培养基进行发酵培养；

3)取发酵液离心除去细胞，得发酵上清液；用镍柱进行纯化，并用SDS-PAGE电泳检测纯度，BCA检测浓度，得纯度为80％以上、浓度为1.0mg/ml以上的溶液；冷冻干燥，得重组人胶原蛋白肽。

8.一种如权利要求1所述的重组人胶原蛋白肽在医药或化妆品领域的应用。