[发明专利]一种复苏细胞的方法及应用

说明书

本发明公开了一种复苏细胞的方法及应用，方法包括以下步骤：S1、将存储有待复苏细胞的冻存管进行解冻融化得到细胞液体；S2、向步骤S1中获得的细胞液体中加入PBS，混匀获得细胞混合溶液，所述PBS与细胞液体的体积比为4:1；S3、将混匀后的细胞混合溶液加入六孔板的其中一孔中，放入细胞培养箱中静置几分钟，吸弃上清液；S4、向吸干上清液的孔中加入培养液重悬细胞沉淀，放入细胞培养箱中培养，所述培养液的与加入孔中的细胞混合溶液中细胞液体的体积为5:1。本发明不需要使用离心机，也不需要对细胞进行洗涤就能实现细胞复苏，且复苏时间较短，能够适用于没有离心机、细胞数量少、时间紧迫的场合。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种复苏细胞的方法及应用。

背景技术

冻存和复苏细胞是细胞生物学实验中很重要的基本操作。一般细胞冻存液为含有10％(v/v)二甲基亚砜(DMSO)的细胞培养液，因此，传统的复苏方法在进行细胞复苏之间需要对细胞进行洗涤除去二甲基亚砜(DMSO)，传统的复苏方法主要采用离心机进行离心去上清液的方式，所以，传统的复苏方法要用到离心机进行细胞洗涤。然而，传统的复苏方法在一些场合不太适用：

(1)在暂时没有合适的离心机可用的场合，比如离心机出现故障正在维修期间；

(2)细胞数量少，如何进行常规洗涤操作会损失较多细胞的场合；

(3)时间紧迫，没有洗涤细胞的充足时间的场合。

发明内容

本发明的目的在于提供一种复苏细胞的方法，不需要使用离心机，也不需要对细胞进行洗涤就能实现细胞复苏，且复苏时间较短，能够适用于没有离心机、细胞数量少、时间紧迫的场合。

本发明通过下述技术方案实现：

一种复苏细胞的方法，包括以下步骤：

S1、将存储有待复苏细胞的冻存管进行解冻融化得到细胞液体；

S2、向步骤S1中获得的细胞液体中加入PBS，混匀获得细胞混合溶液，所述PBS与细胞液体的体积比为4:1；

S3、将混匀后的细胞混合溶液加入六孔板的其中一孔中，放入细胞培养箱中静置几分钟，吸弃上清液；

S4、向吸干上清液的孔中加入培养液重悬细胞沉淀，放入细胞培养箱中培养，所述培养液的与加入孔中的细胞混合溶液中细胞液体的体积为5:1。

细胞冻存液一般含有10％的二甲基亚砜(DMSO)，加入这些DMSO的目的在于防止在细胞冻存时细胞的内容物形成冰晶，进而损伤细胞，所以DMSO是一种细胞冻存保护剂；但是，DMSO有一定的细胞毒性，在复苏细胞是必须去除，因此传统的细胞复苏采用离心去除上清液去除DMSO。

申请人通过长期研究和实验发现：

(1)培养细胞在静置时会自然下沉，特别是一些贴壁生长的培养细胞，例如人宫颈癌细胞Hela细胞，在静置5分钟时，超过80％的悬浮细胞会下沉到培养容器的底部；

(2)六孔板的其中一个孔加入5ml培养液后，再用移液器吸取丢弃这些培养液后，在这个培养孔残留的培养液只有约0.08ml；

(3)当DMSO浓度小于0.1％时，对细胞的毒性可以忽略，不会干扰细胞的正常培养，通常被认为没有细胞毒性。

本发明所述方法的发明构思是基于上述发现获得：

本发明的细胞液体不经过离心沉淀去上清液进行细胞洗涤去除DMSO，而是直接将细胞液体与PBS的混合液体直接加入六孔板的其中一孔中，静置吸弃上清液，吸干上清液后的孔中DMSO的残留量小于0.1％，然后直接加入培养液进行配方复苏。