[发明专利]一种伪狂犬病病毒四基因缺失株及应用

说明书

本发明属于动物疫苗制备技术领域，具体涉及一种伪狂犬病病毒四基因缺失株及应用，所述的伪狂犬病病毒流行毒株缺失了gI、gE‑TK和gG基因。该伪狂犬病病毒流行毒株基因缺失突变株是由伪狂犬病病毒强毒株PRV JXFC/2015株毒力基因gI、gE‑TK和gG的部分缺失构建而成，所述四基因缺失毒株保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:V202142。本发明的伪狂犬病病毒基因缺失株是一株弱毒株，对伪狂犬病病毒有较好的免疫保护效果，适于作为防治伪狂犬病的疫苗候选株。可在制备伪狂犬病病毒四基因缺失疫苗中应用。

技术领域

本发明属于动物病毒学及动物基因工程技术领域，具体涉及一种伪狂犬病病毒四基因缺失株及应用，所述毒株缺失了伪狂犬病病毒gI/gE/TK/gG四个基因。本发明的伪狂犬病病毒基因缺失株是一株弱毒株，对伪狂犬病病毒有较好的免疫保护效果，适于作为防治伪狂犬病的疫苗候选株。可在制备伪狂犬病病毒四基因缺失疫苗中应用。

背景技术

伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)导致的多种家畜和野生动物发病的一种急性传染病，对猪的危害最大，以发热、奇痒及脑脊髓炎为特征。PRV能够感染各个日龄的猪群，导致不同的临床症状。猪伪狂犬病广泛分布于世界各地，给养猪业带来了重大经济损失。疫苗免疫接种是防控伪狂犬病最有效的方式，经过几十年的免疫防控，猪伪狂犬病的防控已经取得较好的效果。2011年末，我国出现了猪伪狂犬病新疫情，很多免疫了伪狂犬病病毒Bartha-K61株疫苗的猪场仍然出现伪狂犬病暴发，对毒株进行序列分析表明为经典毒株变异产生的变异毒株。变异毒株与经典疫苗毒株属于不同的基因亚群，与国内早期分离毒株亲缘关系较远，是经典疫苗毒株对变异毒株保护不足的原因之一。因此，为了有效防控当前伪狂犬病的流行，需要针对目前临床流行的伪狂犬病病毒变异株开发新的疫苗。

本申请人所在的农业微生物学国家重点实验室与生猪健康养殖协同创新中心的课题组一直从事国内 PRV流行病学调查与机制研究工作，本发明从实验室近年来分离的PRV毒株中筛选出PRV/JXFC/2015株，研究表明其与伪狂犬病病毒变异株的亲缘关系较近，对小鼠和猪的致病力明显高于经典毒株，是能开发有效防控当前伪狂犬病流行的基因缺失疫苗的理想候选毒株。

发明内容

本发明第一个目的在于构建一株伪狂犬病病毒流行株gI/gE/TK/gG四基因缺失株，作为一种基因缺失弱毒疫苗来克服现有猪伪狂犬病疫苗针对当前伪狂犬病病毒变异株保护力不足的缺点。

本发明第二个目的在于提供一种构建该伪狂犬病病毒流行株gI/gE/TK/gG四基因缺失株的方法。

本发明第三个目的是提供该伪狂犬病病毒流行株gI/gE/TK/gG四基因缺失株的应用效果。

本发明通过下述技术方案实现：

本发明从送检的疑似猪伪狂犬病病料中通过微生物学分离方法得到一株伪狂犬病病毒PRV JXFC/2015，于2021年5月20日送交中国.武汉.武汉大学中国典型培养物保藏中心(CCTCC),保藏编号为CCTCC NO：V202143。对该伪狂犬病病毒的gB、gC和gE序列测定发现其与当前流行的伪狂犬病病毒变异株亲缘关系较近。动物回归实验显示，该毒株毒力较强，免疫原性良好，适合作为疫苗研究的候选毒株。

本发明构建的伪狂犬病病毒流行株gI/gE/TK/gG四基因缺失株，是将该毒株基因组中的gI/gE、TK 和gG(俗称糖蛋白)的部分基因被敲除后得到的。具体敲除的基因片段如下所述。