[发明专利]一种甲氨蝶呤的核酸适配体、核酸适配体衍生物及其应用

说明书

本发明公开了一种甲氨蝶呤的核酸适配体、核酸适配体衍生物及其应用，其核苷酸序列包括序列1‑5中所示的DNA分子。核酸适配体可以是各种同源性较高的类似序列或由本发明序列得到的衍生物。本发明首次利用核酸适配体HMX38与甲氨蝶呤的特异性结合作用建立了检测甲氨蝶呤的方法。本发明的核酸适配体及其衍生物可用于制备甲氨蝶呤检测探针、制备药物载体或者用于药物设计与开发、药物分离与纯化等，具有能够与甲氨蝶呤高特异性和高亲和力结合、无免疫原性、能够化学合成、生物相容性好、分子量小、稳定、易于保存等优点。

技术邻域

本发明涉及一种核酸适配体、核酸适配体衍生物及其应用，具体涉及一种可结合甲氨蝶呤的核酸适配体、核酸适配体衍生物及其在识别并结合甲氨蝶呤的应用。

背景技术

甲氨蝶呤(MTX)是一种叶酸拮抗剂，广泛用于多种癌症和炎症性疾病的临床治疗。据报道，近700种癌细胞对MTX敏感，其中急性淋巴母细胞白血病细胞系和急性髓系白血病细胞系对MTX最敏感。MTX能够干扰四氢叶酸的合成，进而抑制细胞内DNA和RNA的合成，从而起到抗肿瘤的效果。然而，MTX存在着治疗窗窄，毒副作用大的问题，大剂量甲氨蝶呤（HDMTX）诱导的不良反应主要有肾毒性、骨髓抑制、黏膜炎、胃肠道反应和神经毒性，严重的甚至有可能危及患者的生命安全。根据美国FDA推荐标准，HDMTX用药后的清除率需达到24小时血药浓度≤10μmol/L，48小时≤1μmol/L，72小时＜0.2μmol/L，目前国内大多数研究采用的标准是24小时血药浓度≤10μmol/L，48小时≤1μmol/L，72小时＜0.1μmol/L。目前，临床上MTX血药浓度的监测常常是利用高效液相色谱（HPLC）、荧光偏振免疫分析（FPIA）、酶联免疫（ELISA）或液相色谱结合串联质谱（LC-MS/MS）。这些方法或成本高或耗时长或操作复杂，因此，如何快速高效简便的检测MTX的血药浓度已成为亟待解决的问题。

核酸适配体（Aptamer）通常是利用指数富集配体的系统进化技术（Systematicevolution of ligands by exponential enrichment，SELEX），从核酸分子文库中筛选得到的，能够高亲和力，高特异性识别靶标的单链核酸分子，由于其具有类似抗体的性质，可被人工合成，所以又被称为化学抗体。Aptamer相较于抗体具有更多的优势，如具有更高的亲和力和特异性，无免疫原性，能够化学合成，成本低，稳定性好，易于保存等。近年来，Aptamer已广泛用于各种分子探针和生物传感器的研发。

开发特异性识别MTX的Aptamer，将有望提供一种新的快速高效检测MTX血药浓度的手段。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种能够高特异性和高亲和力结合MTX的核酸适配体、核酸适配体衍生物及其应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为一种MTX的核酸适配体。所述的核酸适配体的核苷酸序列包括以下序列1-序列5所示的DNA片段：

序列1为HMX72：

GGAGGCTCTCGGGACGACGGACGCGGGATGTTTGGGGGACCCACGTTTGTCGTCCCGATGCTGCAATCGTAA

序列2为HMX38T：

CGACGGACGCGGGATGTTTGGGGGACCCACGTTTGTCG

序列3为HMX38：

GGGCGAACGCGGGATGTTTGGGGGACCCACGTTCGCCC

序列4为HMX32：

CGAACGCGGGATGTTTGGGGGACCCACGTTCG

序列5为HMX24：

CGCGGGATGTTTGGGGGACCCACG；