[发明专利]一种金黄色葡萄球菌快速检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种金黄色葡萄球菌快速检测试剂盒，它包括：Fe₃O₄磁珠特异性富集生物探针、万古霉素溶液、胶体金溶液、磁铁；所述的Fe₃O₄磁珠特异性富集生物探针是金黄色葡萄球菌适配体修饰的四氧化三铁磁珠特异性富集生物探针。

2.根据权利要求1所述的一种金黄色葡萄球菌快速检测试剂盒，其特征在于：所述的金黄色葡萄球菌适配体基因序列为5’NH₂-GCA ATG GTA CGG TAC TTC CTC GGC ACG TTC TCAGTA GCG CTC GCT GGT CAT CCC ACA GCT ACG TCA AAA GTG CAC GCT ACT TTG CTA A-3’。

3.根据权利要求2所述的一种金黄色葡萄球菌快速检测试剂盒，其特征在于：所述的Fe₃O₄磁珠特异性富集生物探针浓度为0.1-0.5mg/mL；所述的万古霉素溶液浓度为7.8125μM-500μM；所述的胶体金粒径为13-48nm。

4.根据权利要求3所述的一种金黄色葡萄球菌快速检测试剂盒，其特征在于：所述的Fe₃O₄磁珠特异性富集生物探针是由以下方法制备的：

1） 将六水合氯化铁和柠檬酸三钠加入到乙二醇中，完全溶解后，使六水合氯化铁终浓度为0.2mol/L，柠檬酸三钠终浓度为0.034mol/L；

2）向1）加入乙酸钠，乙酸钠终浓度为0.73mol/L，搅拌30min；

3）将上述溶液2）转移反应釜中200℃反应10h，冷却后，取出黑色溶液，用磁铁吸出黑色固体四氧化三铁，依次用蒸馏水、乙醇交替洗涤3-5次，得到羧基化Fe₃O₄磁珠；

4）取羧基化Fe₃O₄磁珠，溶于pH 6的PBS缓冲液，使其浓度达到1-4mg/mL；

5）向4）中加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐和 N-羟基琥珀酰亚胺，使其在4）的缓冲液中的浓度均达到2.5-6mg/mL ，7℃孵育60min，PBS洗涤3次，重悬于pH 7.4的PBS缓冲液，加入浓度为6µM-10µM金黄色葡萄球菌适配体10μL-60μL；

6）混合溶液在4℃孵育过夜，用磁铁分离溶液，弃去上清，再用pH 7.4PBS缓冲液洗涤3次，重悬于pH 7.4 PBS缓冲液中，得到Fe₃O₄磁珠特异性富集生物探针。

5.根据权利要求4所述的一种金黄色葡萄球菌快速检测试剂盒，其特征在于：所述的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐和 N-羟基琥珀酰亚胺浓度均为5mg/mL。

6.根据权利要求1、2、3、4或5所述的一种金黄色葡萄球菌快速检测试剂盒，其特征在于：所述的金黄色葡萄球菌适配体浓度为10µM，体积为60μL。

7.根据权利要求6所述的一种金黄色葡萄球菌快速检测试剂盒，其特征在于：所述的胶体金溶液是由以下方法制备的：将合成所需玻璃器皿用硝酸和盐酸体积比为1:3的混合液浸泡30min，用超纯水冲洗三遍，氮气吹干，将1mM的氯金酸加热至沸腾，在搅拌的状态下快速加入4mmol/L柠檬酸三钠，20min后，得胶体金溶液。

8.根据权利要求7所述的一种金黄色葡萄球菌快速检测试剂盒，其特征在于：它还包括用1%甲醛灭活的10⁹CFU/mL菌液阳性标准品、阴性质控去离子水；所述的Fe₃O₄磁珠特异性富集生物探针浓度为0.3mg/mL；所述的万古霉素溶液浓度为62.5μM；所述的胶体金粒径为13nm。