[发明专利]一种骨诱导及免疫双效涂层及制备方法和在骨整合的应用

权利要求书

1.一种骨诱导和免疫双效涂层的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

（1）采用固相多肽合成法得到贻贝衍生肽，记为(DOPA)₆-PEG₅-DBCO，该贻贝衍生肽含多重儿茶酚氨基酸结构单元，并具有可生物点击的二苯基环辛炔基团；

（2）将金属离子Zn²⁺与步骤（1）的贻贝衍生肽的儿茶酚表面残基配位螯合，获得具有免疫活性的生物活性表面；

（3）将BMP-2衍生肽进行叠氮耦联，获得叠氮修饰的BMP-2衍生肽，记为(2-Azido)-PEG₅-BMP-2；

（4）将步骤（2）和步骤（3）所得物通过叠氮与二苯基环辛炔基团之间的环加成生物正交点击化学反应实现BMP-2肽的特异性携载，得到具有骨诱导和免疫功能的双效涂层。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中(DOPA)₆-PEG₅-DBCO的合成方法为：使用丙酮保护的Fmoc-DOPA-OH，采用固相多肽合成法，合成含一个氨基酸间隔的六重儿茶酚氨基酸单元与聚乙二醇长链间隔的二苯基环辛炔基团的贻贝衍生肽，其结构简式为：Ac-(DOPA)-G-(DOPA)-G-(DOPA)-K[(PEG₅)-(Mpa)-(Mal-DBCO)]-(DOPA)-G-(DOPA)-G-(DOPA)。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中BMP-2衍生肽是从BMP-2蛋白核心序列73-92个氨基酸片段中提取得到，其氨基酸序列为KIPKASSVPTELSAISTLYL。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中(2-Azido)-PEG₅-BMP-2是将BMP-2衍生肽分别与2-叠氮乙酸和PEG₅羧基耦联得到。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（4）中是在骨内植物材料表面制备Zn²⁺和BMP-2肽共修饰的双效表面涂层。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述的骨内植物材料包括医用金属基质、聚合物或陶瓷生物材料，所述的医用金属基质包括钛或钛合金、316L不锈钢。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述双效涂层的具体制备步骤如下：

S1：将贻贝衍生肽(DOPA)₆-PEG₅-DBCO溶于PBS缓冲液中，得到(DOPA)₆-PEG₅-DBCO多肽溶液，将TiO₂的石英片浸没在上述多肽溶液中，得到(DOPA)₆-PEG₅-DBCO修饰TiO₂，标记为DBCO-TiO₂；

S2：将DBCO-TiO₂浸泡在醋酸锌溶液中，利用DBCO-TiO₂表面的邻苯二酚残基与Zn²⁺之间的配位螯合作用，制备得到含Zn的TiO₂，标记为Zn；

S3：将叠氮修饰的BMP-2衍生肽(2-Azido)-PEG₅-BMP-2通过生物正交点击化学与金属-酚配位化学的方式制备Zn²⁺和BMP-2肽共修饰TiO₂表面的双效涂层，标记为Zn/BMP-2。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中所述PBS缓冲液的浓度为0.02mM，pH=7.2。

9.一种具有骨诱导和免疫作用的双效涂层，其特征在于，是由权利要求1-8任一项所述方法制备得到。

10.一种如权利要求9所述的双效涂层的应用，其特征在于，是将所述双效涂层用于制备促进骨-内植物界面骨整合的内植物材料方面的应用。