[发明专利]一种一氧化氮电化学传感微电极及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种一氧化氮电化学传感微电极，其特征在于，所述电极以碳纤维构成微电极内芯，所述电极内芯由内而外依次修饰包括金沉积层、NO电催化复合物层和氟化干凝胶屏蔽层。

2.根据权利要求1所述的一氧化氮电化学传感微电极，其特征在于，所述NO电催化复合物层主要为G4-DNA/Hemin复合物，为一条可以形成四链结构的DNA寡核苷酸与亚铁血红素Hemin组成。

3.根据权利要求2所述的一氧化氮电化学传感微电极，其特征在于，所述可以形成四链结构的DNA寡核苷酸通过其5’端-SH与金沉积的碳纤维微电极进行共价连接，并在形成G4结构后与Hemin形成完整的NO电催化复合物，即G4-DNA/Hemin复合物。

4.根据权利要求2或者3所述的一氧化氮电化学传感微电极，其特征在于，所述DNA寡核苷酸含有22个碱基，序列优选为5’-SH-C₆-AGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG-3’。

5.一种权利要求1所述的一氧化氮电化学传感微电极的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将预处理的碳纤维形成碳纤维微电极内芯，利用电沉积在上述碳纤维微电极上沉积金，得到沉积有金单质的碳纤维微电极，随后将NO电催化复合物连接到上述碳纤维微电极，最后包封氟化干凝胶。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)碳纤维微电极的制备：将碳纤维于丙酮中浸泡过夜，待碳纤维晾干后将碳纤维吸入毛细管中制备碳纤维微电极，拉至细尖切割和密封，然后固化，最后在碳纤维底部连接铜丝以建立电接触；

(2)金沉积层的修饰：将步骤(1)制备好的碳纤维微电极依次在超纯水，无水乙醇，超纯水中超声，清洗好的微电极置于氯金酸溶液中电沉积形成金沉积层，沉积完成后，用反复冲洗干净，得到含有金沉积层的碳纤维微电极；

(3)NO电催化复合物层的修饰：将步骤(2)得到的微电极与G4-DNA在DNA修饰缓冲液中室温孵育，退火后冷却至室温，室温条件下，将亚铁血红素Hemin与上述电极在结合缓冲液(Binding buffer)中孵育，在电极上形成G4-DNA/Hemin复合物层，即NO电催化复合物层；

(4)氟化干凝胶屏蔽层的修饰：将步骤(3)修饰好的碳纤维微电极浸涂氟化干凝胶，在室温下干燥得到一氧化氮电化学传感微电极。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中微电极在DNA修饰缓冲液中室温孵育8-12h，将亚铁血红素Hemin与上述电极在结合缓冲液(Binding buffer)中室温孵育30-40min。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中DNA修饰缓冲液中G4-DNA浓度为5-10μM，结合缓冲液中Hemin浓度为0.1-0.2mM。

9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中氟化干凝胶由C₂H₅OH，MTMOS，17-FTMS，HCl组成。

10.一种权利要求1所述的一氧化氮电化学传感微电极在检测复杂生物环境下的NO中的应用。