[发明专利]针对AGR3蛋白的单克隆抗体、制备方法及其应用

说明书

本发明属于单克隆抗体领域，具体公开了针对AGR3蛋白的单克隆抗体、制备方法及其应用。该抗体由保存编号CGMCC‑No.20780的小鼠单克隆抗体细胞株9F10分泌；单克隆抗体在制备检测或诊断AGR3蛋白的试剂中的应用，以及制备抑制结直肠癌转移的药物或试剂中的应用。本发明的单克隆抗体能够特异性识别结肠癌细胞如LoVo细胞及结肠癌组织中的AGR3蛋白，灵敏度高；能够有效抑制AGR3蛋白促进的结肠癌转移。

技术领域

本发明属于单克隆抗体领域，具体涉及一种特异性针对AGR3的单克隆抗体、其制备方法及其应用。

背景技术

恶性肿瘤是全球第二大死亡原因，传统的手术和药物治疗已经难以满足目前的临床需求。在针对恶性肿瘤的治疗方法中，抗体靶向治疗逐渐受到人们的重视，单克隆抗体具有特异性强，靶向性好的优点，目前已有不少单克隆抗体药物应用于临床，并取得了较好的疗效。识别新的肿瘤治疗靶点并开发相应的靶向单克隆抗体具有重要的临床价值和意义。

前梯度蛋白3(anterior gradient protein 3，AGR3)属于PDI家族(蛋白质二硫键异构酶)中的一员，主要定位于内质网，同时也可分泌至细胞外。有研究报道AGR3与多种肿瘤的发生发展密切相关，AGR3在乳腺癌、卵巢癌和前列腺癌中的表达均出现显著上调。AGR3也被认为是肝内胆管癌的诊断标志物。更为重要的是，分泌型AGR3可以促进乳腺癌细胞的转移。AGR3 蛋白可以促进结直肠癌细胞的迁移，提示AGR3可能作为肿瘤转移治疗的潜在靶点，因此有必要开发针对AGR3的单克隆抗体，为肿瘤的靶向治疗提供新的思路和方法。

发明内容

本发明目的在于提供了一种单克隆抗体、制备及其应用，主要解决了目前技术中缺少相应有效阻断AGR3促进肿瘤细胞转移作用的物质，缺少相应单克隆抗体制备方法等问题。

单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤，

构建pET-28a-AGR3-His重组表达载体；

诱导表达并通过镍柱亲和层析纯化得到AGR3重组蛋白；

使用AGR3蛋白免疫ICR鼠，取鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合获得单克隆细胞，筛选出能分泌针对AGR3蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，制备腹水，纯化抗体。

一种方式，pET-28a-AGR3-His重组表达载体构建方式为，

利用人的基因组cDNA为模板扩增AGR3开放阅读框序列，与酶切后的 pET28a载体进行融合重组，酶切位点为BamHI和HindIII。

一种方式，所述能分泌针对AGR3蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其为保藏号CGMCC No.20780的鼠单抗细胞株。

保藏号为CGMCC No.20780的杂交瘤细胞。

一种方式，其由下述方法制备而得，

构建pET-28a-AGR3-His重组表达载体；

诱导表达并通过镍柱亲和层析纯化得到AGR3重组蛋白；

使用AGR3蛋白免疫ICR鼠，取鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合获得单克隆细胞，筛选出能分泌针对AGR3蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

单克隆抗体，能特异性识别、靶向AGR3蛋白，其中，所述单克隆抗体表现出对AGR3促进肿瘤细胞转移具有抑制作用。

一种方式，所述单克隆抗体由保藏号为CGMCC No.20780的鼠单抗细胞株分泌。

前述单克隆抗体在制备治疗肿瘤疾病药物中的应用。

一种方式，单克隆抗体作为AGR3对肿瘤细胞转移促进作用的抑制剂。