[发明专利]一种清金化痰汤生物限值测定方法

说明书

本发明公开了一种清金化痰汤生物限值测定方法，属于药物分析检测技术领域，步骤如下：步骤1、配制清金化痰汤水提物冻干粉溶液和LPS溶液，培养RAW264.7巨噬细胞；步骤2、监测RAW264.7巨噬细胞接种密度与孵育时间的关系；步骤3、监测清金化痰汤水提物冻干粉溶液对RAW264.7细胞活力的影响；步骤4、测定基于RAW264.7巨噬细胞分泌功能的清金化痰汤水提物冻干粉生物活性限值；步骤5、测定基于RAW264.7巨噬细胞吞噬功能的清金化痰汤水提物冻干粉生物活性限值；步骤6、数据处理；本发明通过建立关联其功效及药理作用的生物活性测定方法，对清金化痰汤的质量控制具有重要意义。

技术领域

本发明属于药物分析检测技术领域，具体地，涉及一种清金化痰汤生物限值测定方法。

背景技术

清金化痰汤来源于明代叶文龄所著的《医学统旨》，由黄芩、栀子、贝母、桑白皮、瓜蒌仁、橘红、桔梗、麦冬、知母、茯苓、甘草11味药物组成，其清热润肺、化痰止咳的功效显著，是《古代经典名方目录(第一批)》100首经典名方之一。为充分保证和发挥其临床疗效，建立科学全面的质量控制方法具有重要意义。常用的中药质控方法包括药材的外观形状鉴别、化学定性鉴别、指标成分检测、化学指纹图谱等。但由于中药化学成分复杂，应用单一的质控方法难以全面控制其质量并反映临床疗效。生物活性测定是指结合中药及其制剂的功能主治或毒副作用，寻找在生物体上的适宜反应，从而更加全面有效地评价和控制中药质量，完善中药质量评价体系，保证药物临床使用的安全有效。近年来已经有不少研究报道了将生物活性测定应用于对中药生物效应评价的研究，且水蛭生物活性测定已作为质量控制方法之一被药典收载，将生物活性测定应用于中药质量控制领域已经成为一种趋势。

因清金化痰汤组方及所含化学成分复杂，通过文献检索发现，关于清金化痰汤物质基准及质量控制的研究报道鲜少，因此建立关联其功效及药理作用的生物活性测定方法，对清金化痰汤的质量控制具有重要意义。

本发明结合清金化痰汤抗炎及免疫调节的药理作用，建立了基于RAW264.7巨噬细胞吞噬及分泌功能的生物限值测定方法，用于清金化痰汤的质量控制。

发明内容

本发明的目的在于提供一种清金化痰生物限制测定方法。

本发明需要解决的技术问题为：

因清金化痰汤组方及所含化学成分复杂，通过文献检索发现，关于清金化痰汤物质基准及质量控制的研究报道鲜少，因此建立关联其功效及药理作用的生物活性测定方法，对清金化痰汤的质量控制具有重要意义。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种清金化痰汤生物限值测定方法，具体包括如下步骤：

步骤1、配制清金化痰汤水提物冻干粉溶液和LPS溶液，培养RAW264.7巨噬细胞；

步骤2、监测RAW264.7巨噬细胞接种密度与孵育时间的关系；

步骤3、监测清金化痰汤水提物冻干粉溶液对RAW264.7细胞活力的影响；

步骤4、测定基于RAW264.7巨噬细胞分泌功能的清金化痰汤水提物冻干粉生物活性限值；

步骤5、测定基于RAW264.7巨噬细胞吞噬功能的清金化痰汤水提物冻干粉生物活性限值；

步骤6、数据处理，利用IBM SPSS Statistics 19.0统计软件对实验数据进行统计学处理，多组间比较采用单因素方差分析，组间比较采用LSD检验，P0.05为有统计学意义。

其中，步骤4具体包括以下步骤：

步骤A1、测试清金化痰汤水提物冻干粉对LPS诱导RAW264.7巨噬细胞分泌IL-1β、IL-6含量的影响