[发明专利]一种分化液及其制备方法

说明书

本发明公开了一种分化液及其制备方法，所述分化液的成分包括苏木素、无水乙醇、二乙二醇、蒸馏水、硫酸钠、聚乙二醇、冰醋酸。其制备方法包括以下步骤：S1、按计量称取苏木素、无水乙醇、二乙二醇、蒸馏水、硫酸钠、聚乙二醇、冰醋酸；S2、在烧杯中依次加入苏木素、无水乙醇、二乙二醇，加热，直至苏木素完全溶解，得到苏木素溶液；S3、在容器中依次加入蒸馏水、硫酸钠、聚乙二醇，待硫酸钠完全溶解后，得到硫酸钠溶液；S4、将硫酸钠溶液与苏木素溶液混合，得到混合溶液，在混合溶液中缓慢加入冰醋酸，直至将混合溶液的PH值调整为3.5～4.5；S5、静置12～24小时后，将混合溶液进行过滤，得到的滤液即为分化液。

技术领域

本发明涉及生化领域，尤其涉及一种分化液及其制备方法。

背景技术

苏木精—伊红染色法(hematoxylin-eosinstaining)，简称HE染色法，其为石蜡切片技术里常用的染色法之一。苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。

苏木精—伊红染色法中的操作步骤主要包括切片—烤片—脱蜡—水化—苏木素染色—分化—返蓝—伊红染色—脱水—透明—封片；其中，分化是选择性地脱除非目的物染色的过程。组织切片经苏木素染液染色后，细胞核染色过度会出现过染，细胞核以外的细胞质、胶原纤维等也附有少量苏木素染料而着色。这时，通过分化液把过染的细胞核和不应着色的部位脱色，从而使染色的结果更加清晰，染色的层次更加分明。

常用的分化液为1％盐酸-乙醇溶液，其机制为在酸性环境有很多H⁺,使组织表面的电荷发生改变，之前染色所形成的色淀解离，与组织结合的染料便慢慢脱下来，然而该分化液在操作过程中存在2个问题：1)分化时要特别注意掌握好尺度，必须在显微镜控制下进行，才能恰到好处，否则很容易造成分化过度，染色过浅的情况；2)分化后必须及时把切片组织上残留的分化液冲洗干净，否则容易引起组织褪色或染色过淡。因此，有必要研究一种分化液来解决上述问题。

发明内容

本发明目的是针对上述问题，提供一种提高分化效果的分化液及其制备方法。

为了实现上述目的，本发明的技术方案是：

一种分化液，所述分化液的成分包括苏木素、无水乙醇、二乙二醇、蒸馏水、硫酸钠、聚乙二醇、冰醋酸，各成分的质量百分比为：苏木素0.1～0.8％、无水乙醇1.5～3.5％、二乙二醇5～9％、蒸馏水80～90％、硫酸钠0.1～2.5％、聚乙二醇0.5～3.3％、冰醋酸1.5～5.5％。

进一步的，所述分化液中各成分的质量百分比为：苏木素0.1％、无水乙醇2.5％、二乙二醇7％、蒸馏水85.8％、硫酸钠0.4％、聚乙二醇1％、冰醋酸3.2％。

一种分化液的制备方法，包括以下步骤：

S1、按计量称取苏木素、无水乙醇、二乙二醇、蒸馏水、硫酸钠、聚乙二醇、冰醋酸；

S2、在烧杯中依次加入苏木素、无水乙醇、二乙二醇，加热，直至苏木素完全溶解，得到苏木素溶液；

S3、在容器中依次加入蒸馏水、硫酸钠、聚乙二醇，待硫酸钠完全溶解后，得到硫酸钠溶液；

S4、将硫酸钠溶液与苏木素溶液混合，得到混合溶液，在混合溶液中缓慢加入冰醋酸，直至将混合溶液的PH值调整为3.5～4.5；

S5、静置12～24小时后，将混合溶液进行过滤，得到的滤液即为分化液。

进一步的，所述步骤S5中进行过滤时使用1000～2000目的过滤网进行过滤。

与现有技术相比，本发明具有的优点和积极效果是：