[发明专利]用于分离细胞外核酸的快速方法

权利要求书

1.一种通过将细胞外核酸结合于带有阴离子交换基团的固相以从样品分离所述细胞外核酸的方法，所述方法包括下列步骤：

a.酸化所述样品以建立结合条件，并在结合混合物中将所述细胞外核酸结合于所述固相，所述结合混合物具有允许所述细胞外核酸结合于所述固相的所述阴离子交换基团的≤6.5的第一pH，其中使用磁性粒子作为所述固相；

b.分离带有所述被结合的细胞外核酸的所述固相；

c.任选地清洗所述细胞外核酸；

d.在比用于将所述细胞外核酸结合于所述固相的第一pH更高的第二pH下，从所述固相洗脱细胞外核酸；

e.从洗脱液分离所述细胞外核酸；

其中所述样品是通过分离从体液移除细胞而获得的无细胞或贫细胞的样品。

2.权利要求1的方法，其包含下列步骤：

a.酸化所述样品以建立结合条件，并在结合混合物中将所述细胞外核酸结合于所述固相，所述结合混合物具有允许所述细胞外核酸结合于所述固相的所述阴离子交换基团的≤6.5的第一pH；其中所述样品占所述结合混合物体积的至少85％，其中使用磁性粒子作为所述固相；

b.分离带有所述被结合的细胞外核酸的所述固相；

c.任选地清洗所述细胞外核酸；

d.在比用于将所述细胞外核酸结合于所述固相的第一pH更高的第二pH下，从所述固相洗脱细胞外核酸；

e.从洗脱液分离所述细胞外核酸。

3.权利要求1或2的方法，其中步骤a至d用作预处理流程以便为后续步骤e从所述样品浓缩所述细胞外核酸，任选地其中在步骤e中使用至少一种离液剂和/或至少一种醇来分离所述核酸。

4.权利要求2或3的方法，其包含下列步骤：

a.酸化所述样品以建立所述结合条件，并在结合混合物中将所述细胞外核酸结合于所述固相，所述结合混合物具有允许所述细胞外核酸结合于所述固相的所述阴离子交换基团的≤6.5的第一pH，其中所述样品占所述结合混合物体积的至少85％，并且其中所述固相由带有叔氨基的磁性粒子提供；

b.分离带有所述被结合的细胞外核酸的所述固相；

c.任选地清洗所述细胞外核酸；

d.从所述固相洗脱细胞外核酸，其中被洗脱的核酸的长度和保持结合于所述阴离子交换基质的核酸的长度通过调整洗脱条件来控制，其中长度为约1000nt或更长、700nt或更长、或500nt或更长的核酸在所述洗脱步骤中绝大多数保持结合于所述固相；

e.从洗脱液分离所述细胞外核酸。

5.权利要求4的方法，其中在步骤d.中，通过调整所述固相表面上正电荷的浓度，使得在步骤d.期间只有较长的核酸分子保持结合于所述固相，而较小的核酸被洗脱，来实现短核酸的选择性洗脱，其中截止值通过选择在洗脱期间使用的pH值来控制。

6.权利要求1的方法，其中在步骤d.中，细胞外核酸按照它们的尺寸被选择性洗脱，其中所述尺寸分级洗脱步骤包括在高于所述第一pH的第二pH下洗脱一部分结合于所述固相的细胞外核酸，其中在这一步骤中从所述固相洗脱的核酸的平均长度短于保持结合于所述固相的核酸的平均长度。