[发明专利]一种以分子图像方式定量组织内内源性代谢物的质谱方法

说明书

本申请提供了一种以分子图像方式定量组织内内源性代谢物的质谱方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)模拟组织模型的选择；(2)标准品的添加；(3)配制基质并加入内标。本申请的方法使用N‑(1‑萘基)乙二胺二盐酸盐作为基质，¹³C作为内标检测脑胶质瘤组织中的2‑羟基戊二酸在灵敏度，特异性和检测限上取得了良好的效果。

技术领域

本发明属于医学检测和质谱检测领域，具体地，本申请提供了一种定量组织内内源性代谢物的质谱方法，包括以下步骤：(1)模拟组织模型的选择；(2)标准品的添加；(3)配制基质并加入内标；其使用N-(1-萘基)乙二胺二盐酸盐作为基质，¹³C作为内标定量检测脑胶质瘤组织中的2-羟基戊二酸。

背景技术

在多种癌症中发现异柠檬酸脱氢酶(isocitrate dehydrogenase，IDH)基因突变，包括胶质瘤，急性髓系白血病，前列腺癌，甲状腺癌，结肠癌，软骨肉瘤，胆管癌，黑色素瘤及副神经节瘤等。已知IDH基因突变会将α-酮戊二酸(α-Ketoglutarate，α-KG)还原为2-羟基戊二酸(2-Hydroxyglutarate，2-HG)，从而导致组织内致癌代谢产物2-HG的积累。高水平的2-HG已被证明抑制依赖α-KG的双加氧酶包括组蛋白和DNA去甲基酶的活性，通过影响染色质结构而促进癌症的发生和发展。2-HG在正常细胞中天然水平很低，而IDH基因突变后会导致2-HG含量明显增加，因此可通过检测2-HG这一致癌代谢产物来评估IDH基因突变与否，进而辅助临床进行精准诊断和个性化治疗。

现有的2-HG检测方案包括生化法，磁共振波谱法及质谱法等，其中质谱法主要包括常压质谱法，色谱质谱联用的方法及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱。生化法基本基于比色法或酶分析法，在分析前需要进行组织匀浆等冗杂耗时的样本前处理过程；色谱质谱联用的方法通量低，一次只能分析一例患者体内的2-HG的含量。磁共振波谱法虽能够术前无创评估患者体内2-HG的含量，但成本高，需要复杂的数据后处理过程，如基线校正算法等。常压质谱法虽能快速进行2-HG定性检测，但在2-HG的定量检测方面尚不能满足临床需求。

因此，本领域中仍然存在进一步改进2-HG定量检测，特别是高灵敏度和准确度的质谱检测方法的需求。

发明内容

申请人尝试通过质谱成像法进行2-HG的二维绝对定量，突破了成像质谱定量难的困境，使用¹³C标记的同位素内标校正策略和质谱成像相结合的技术方法进行2-HG定量分析；实现了快速、精准绝对定量组织内2-羟基戊二酸的含量。

一方面，本申请提供了一种定量组织内内源性代谢物的质谱方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)模拟组织模型的选择；

(2)标准品的添加；

(3)配制基质并加入内标；

(4)质谱检测，绘制标准曲线并依据标准曲线计算代谢物水平。

进一步地，所述质谱方法为基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱。

进一步地，所述内源性代谢物为2-羟基戊二酸。

进一步地，所述组织为肿瘤组织，优选胶质瘤组织。

进一步地，模拟组织模型为肝脏组织。

进一步地，基质为1-5-DAN，9-AA，DHB，优选为N-苯基萘胺类化合物，更优选N-(1-萘基)乙二胺二盐酸盐。

另一方面，本申请提供了上述方法在检测基因突变，优选异柠檬酸脱氢酶基因突变中的应用。

进一步地，所述内标为同位素内标，优选¹³C标记内标。

进一步地，上述方法或应用用于非诊断用途。