[发明专利]一种基于肿瘤细胞膜的生物活性制剂及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种基于肿瘤细胞膜的生物活性制剂，该制剂的药物活性成分包含CDK5抑制剂和外泌体抑制药物；

所述生物活性制剂为水凝胶；

所述生物活性制剂由CDK5抑制剂、外泌体抑制药物和肿瘤细胞膜囊泡制成；

所述肿瘤细胞膜囊泡为海藻酸钠氧化物修饰的肿瘤细胞膜囊泡；

所述肿瘤细胞膜囊泡尺寸为150~220 nm；

所述CDK5抑制剂为Roscovitine；

所述外泌体抑制药物为二甲基阿米洛利DMA；

所述Roscovitine与二甲基阿米洛利的质量比为1~10：1。

2.如权利要求1所述的生物活性制剂，其特征在于，所述Roscovitine与二甲基阿米洛利的质量比为5:1。

3.一种如权利要求1所述的基于肿瘤细胞膜的生物活性制剂的制备方法，其特征在于，制备方法包括：

海藻酸钠氧化物修饰的肿瘤细胞膜囊泡形成凝胶因子，将CDK5抑制剂和外泌体抑制药物分别溶解后混合均匀形成药物溶液，加入凝胶因子的水溶液中搅拌处理，即得成胶溶液；

溶解CDK5抑制剂和外泌体抑制剂的溶剂为去离子水；

加入药物溶液的方法为滴加。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，肿瘤细胞膜囊泡由以下方法制备得到：

（1）收集小鼠肿瘤组织，采用匀浆法得到肿瘤单细胞悬液；

（2）探头超声得到破碎的肿瘤细胞，采用超滤离心方式进行除杂，后采用梯度离心法提取肿瘤细胞膜；

（3）采用超声的方式获得肿瘤细胞膜囊泡。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，肿瘤单细胞悬液通过加入匀浆缓冲液然后研磨获得，所述匀浆缓冲液是含有蔗糖、EDTA、HEPES-NaOH和蛋白酶抑制剂的PBS缓冲液；

蔗糖的浓度为0.1~1 mM；

EDTA的浓度为0.5~5 mM；

HEPES-NaOH的浓度为5~30 mM；

蛋白酶抑制剂的浓度为6.5~8.5 mM，pH为7.4；

步骤（2）中，将收集的肿瘤单细胞悬液在低温下进行探头超声，破碎肿瘤细胞，得到破碎的肿瘤细胞；随后将破碎的肿瘤细胞在低温下进行中速离心，除去黑色素进行纯化，向纯化后的破碎细胞悬液在低温下进行高速离心，得到肿瘤细胞膜沉淀；将肿瘤细胞膜沉淀重新分散后，冷冻保存；

所述低温为0~6℃，探头超声的功率幅度为20~60 %；

探头超声时间为5~15 min；

探头超声的时间间隔为开：2~6 s；关：1~4 s；

所述中速离心的转速为2000~4000 g，离心时间为5~20 min；

所述高速离心的转速为10000~20000 g，离心时间为30~90 min；

将细胞膜沉淀重新分散的溶剂为PBS；

步骤（3）中，将肿瘤细胞膜在低温下采头超声的方式进行膜融合，得到肿瘤细胞膜囊泡，所述低温为0~6℃，超声时间为30~120 s。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，蔗糖的浓度为0.25 mM。

7.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，EDTA的浓度为1 mM。

8.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）中，HEPES-NaOH的浓度为20 mM。

9.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，探头超声的功率幅度为40%。

10.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，探头超声时间为10min。

11.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，探头超声的时间间隔为开：3 s；关：7 s。