[发明专利]长牡蛎含DM9结构域重组蛋白rCgDM9CP-6、制备方法及应用

说明书

本发明公开一种长牡蛎含DM9结构域重组蛋白rCgDM9CP‑6，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；制备方法依次按照如下步骤进行：用引物P1和P2对长牡蛎CgDM9CP‑6基因编码区片段进行PCR扩增，所述引物P1的DNA序列如SEQ ID NO.2所示，所述引物P2的DNA序列如SEQ ID NO.3所示；将PCR扩增产物与pET30a载体经BamHI和Xhol I酶切后通过T4连接酶连接，转化，测序鉴定重组子；将所述重组子转入大肠杆菌Transetta（DE3）表达菌株中进行诱导培养，而后纯化、复性，即得到具有序列表SEQ ID NO.1中氨基酸序列的重组蛋白rCgDM9CP‑6；可在制备抑制革兰氏阳性菌M.luteus药物中的应用。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，尤其涉及一种长牡蛎含DM9结构域重组蛋白rCgDM9CP-6、制备方法及应用。

背景技术

长牡蛎（Crassostrea gigas）是一种重要的海水养殖贝类。由于长牡蛎缺乏适应性免疫防御系统，主要依赖固有免疫系统抵御外源病原微生物的侵染。由于近年来海洋环境的日益恶化，细菌、真菌和病毒引起的多种疾病在长牡蛎的养殖群体中不断爆发，造成了巨大的经济损失。

DM9是一类包含有糖类识别结构域（DM9）并且能够抵抗真菌及细菌感染、促进细胞吞噬行使免疫调节功能的蛋白。研究发现，含DM9结构域蛋白在模式识别、微生物凝集、吞噬调理和细胞凝集等过程中发挥重要作用。果蝇中的一个含DM9结构域蛋白表达量在感染Pseudomonas entomophila后显著上升，另外三个含DM9结构域蛋白形成复合物参与对病原微生物吞噬。在脊椎动物鱼类T. nattereri中，含DM9结构域natterin蛋白家族，对人细胞具有毒性可导致细胞水肿与坏死，甚至导致人永久性残疾。长牡蛎含DM9结构域蛋白不仅能特异性识别微生物和病原相关分子模式（Pathogen-Associated Molecular Patterns,PAMPs），还可参与微生物吞噬、杀灭和清除过程。例如，长牡蛎CgDM9CP-1蛋白中Asp22和Lys43两个结合位点可与MAN特异性结合并且对真菌Y. lipolytica、P. pastoris、革兰氏阴性菌E. coli、V. splendidus及革兰氏阳性菌S. aureus具有识别结合活性，并可与MAN结合；CgDM9CP-2具有凝集多种微生物及结合多种PAMPs活性，可与D-Mannose、LPS及PGN结合。

但是，迄今为止并没有关于长牡蛎含DM9结构域重组蛋白rCgDM9CP-6、制备方法及作为抑制革兰氏阳性菌M. luteus药物的相关报道。

发明内容

本发明是为了解决现有技术所存在的上述问题，提供一种长牡蛎含DM9结构域重组蛋白rCgDM9CP-6、制备方法及应用。

本发明的技术解决方案是：一种长牡蛎含DM9结构域重组蛋白rCgDM9CP-6，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

一种上述长牡蛎含DM9结构域重组蛋白rCgDM9CP-6的制备方法，依次按照如下步骤进行：

a. 用引物P1和P2对长牡蛎CgDM9CP-6基因编码区片段进行PCR扩增，所述引物P1的DNA序列如SEQ ID NO.2所示，所述引物P2的DNA序列如SEQ ID NO.3所示；