[发明专利]一种血清中脂溶维生素质谱快速检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明提供一种血清中脂溶维生素质谱快速检测试剂盒及检测方法，包括如下，取一定体积的血清样本，加入到试剂包C中的96孔板蛋白沉淀板孔内，加入试剂包A中的一定体积的沉淀剂，涡旋混匀，使用负压装置，将96孔板蛋白沉淀板中样本转移至96孔板进样板中，进样分析，应用超高效液相色谱系统，在硅胶基质C18反相色谱柱上，在特定的流动相组成、流动相梯度、流速和进样体积条件下，实现6种脂溶维生素在硅胶基质C18反相色谱柱上的分离，经分离的6种脂溶维生素进入质谱系统检测，正离子模式，特定的离子源参数及MRM参数，实现6种脂溶维生素的质谱检测，本发明提供了一种检测准确高效的血清中脂溶维生素质谱快速检测试剂盒及检测方法。

技术领域

本发明涉及质谱检测技术领域，具体为一种血清中脂溶维生素质谱快速检测试剂盒及检测方法。

背景技术

脂溶维生素是维持身体健康的基本要素，如果没有足够的维生素，器官无法正常运作、皮肤快速老化、视力减退等。与脂溶性抗氧化维生素不足的症状有免疫功能失调、反复感染、神经系统疾病、消化与吸收障碍、心血管疾病、慢性疲劳症和氧化压力增加等。平衡与适量的抗氧化维生素浓度有助于防止自由基的伤害及慢性病形成。维生素A有促进生长、繁殖，维持骨骼、上皮组织、视力和粘膜上皮正常分泌等多种生理功能，维生素A及其类似物有阻止癌前期病变的作用，缺乏时表现为生长迟缓、暗适应能力减退而形成夜盲症。维生素D还有促进皮肤细胞生长、分化及调节免疫功能作用，缺乏维生素D儿童可患佝偻病，成人患骨质软化症。维生素E具有抗氧化保护机体细胞免受自由基的毒害，改善血液循环、保护组织、降低胆固醇、预防高血压。维生素K1是肝脏合成因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ所必须的物质，主要用于各种维生素K缺乏引起的出血性疾病的治疗，还具有镇痛、缓解支气管痉挛的作用，对内脏平滑肌绞痛、胆管痉挛、肠痉挛引起的绞痛有明显的效果。维生素K2具有预防骨质疏松，改善凝血功能等作用。维生素K2中有骨蛋白质，可以和钙生成钙质，从而增加骨密度；维生素K2还能够促进血液中的钙沉积入骨，还能够强化肝脏的解毒功能以及利尿，并且还能够降血压。脂溶维生素摄入量过多易引起中毒现象，若摄入量过少则缓慢出现缺乏症状。

目前，在临床实验室中用于血清中脂溶性维生素分析的常用方法有免疫分析法、高效液相色谱法、高效液相色谱法串联质谱法。与传统的高效液相色谱法和免疫分析法相比，超高效液相色谱串联质谱法具有更好的分离能力、更高特异性和更高灵敏度。血清中25-(OH)VD2和VK1含量低，大部分为2ng/mL左右,因此为提高检测灵敏度，前处理需要液液萃取进行富集，同时使用APCI离子源才能实现准确定量。而ESI离子源是最为常用的电离模式，有的质谱仪只配有ESI离子源，同时配备ESI和APCI离子源的仪器，使用过程中针对不同检测项目，需要两种离子源进行切换。因此目前的检测方法对仪器提出更高要求。目前检测方法使用传统的离心管和进样瓶，离心管和进样瓶的标记，离心和液液萃取后两次样本转移，均为人工操作，过程繁琐费时，影响检测重复性准确性的因素较多。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种检测准确高效的血清中脂溶维生素质谱快速检测试剂盒及检测方法，解决了上述背景技术中提出的问题。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种血清中脂溶维生素质谱快速检测试剂盒，包括作为校准品制备和样本制备使用的试剂包A、作为质控的试剂包B和作为前处理沉淀蛋白和进样分析使用的试剂包C。

进一步的，所述试剂包A为乙醇沉淀剂。

进一步的，所述试剂包B包括低质控和高质控，所述低质控和高质控均为牛血清白蛋白缓冲液中加入6种脂溶维生素的混合标准溶液制备而成，所述低质控浓度控制在线性S3浓度，所述高质控浓度控制在线性S5浓度，校准为6种脂溶维生素的混合标准溶液，浓度控制在S1a-S7a之间。

进一步的，所述牛血清白蛋白缓冲液中的缓冲液为PBS缓冲液，其pH在7.2～7.4之间,牛血清白蛋白浓度为5％。