[发明专利]一种高效提取铁皮石斛中生物碱的方法

说明书

本发明涉及通过酶解高效提取铁皮石斛中生物碱的方法，包括：将铁皮石斛清洗、干燥、切条，球磨粉碎；将粉碎后的铁皮石斛加水溶解，添加纤维素酶和半纤维素酶进行酶解；酶解后再加入氨肽酶和胰酶水解，灭酶、冷却、过滤；滤渣用乙醇和乙酸乙酯重复浸提、过滤，合并滤液，蒸干，即得到铁皮石斛生物碱。本发明通过采用机械和化学结合的球磨、多种酶的水解处理、乙醇和乙酸乙酯浸提的方法，有效地提高了铁皮石斛生物碱的提取率，且该方法的工艺简单，易于控制，便于实施，对铁皮石斛在食品和医药领域的开发具有重要意义。

技术领域

本发明涉及通过酶解高效提取铁皮石斛中生物碱的方法。

背景技术

铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)为兰科第二大属，为多年生草本植物，是石斛中的上品，具有很高的药用价值，具有免疫调节、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抑菌、滋阴、降血糖等药用功效。对铁皮石斛的研究较早，东汉时期《神农本草经》中将其列为上品，唐开元年间又将其列为中华“九大仙草”之首，李时珍也在著作《本草纲目》中评价铁皮石斛“主治胃中虚热，发热自汗，痈疽排脓内塞”。铁皮石斛中活性成分多种多样，主要包括石斛多糖、生物碱、多酚、氨基酸、糖苷类、芪类及其衍生物以及多种挥发性成分。

生物碱是铁皮石斛中重要的活性成分之一，具有降血糖、抗白内障、减轻肝脏脂肪变性、改善胃肠道运动、抗炎、抗肿瘤等药理作用。铁皮石斛中生物碱的含量较低、约为0.02％。虽然铁皮石斛中生物碱含量较低，但就其中所含的特有生物碱成分而言，铁皮石斛的质量要好于其他石斛，如金钗石斛(陈晓梅，等，铁皮石斛与金钗石斛化学成分的比较，《中国医学科学院学报》，2006，28(4)：524-529)。

目前，对于铁皮石斛生物碱的提取方法，如专利CN108164541A公开了石灰水处理、微波提取的方法，微波能耗高，设备贵，生物碱的提取率低。专利CN111196865A公开了纤维素酶水解，酸性乙醇提取、二氯甲烷萃取的方法，生物碱的提取率非常低，且二氯甲烷有一定的毒性。专利CN103566195A公开了闪提器中乙醇提取游离和结合生物碱的方法，步骤和操作繁琐、纯度较低。张利等人(铁皮石斛中石斛多糖与石斛碱的纤维素酶法提取研究，《化学研究与应用》，2011,23(3)：356-359)利用纤维素酶酶解、90％乙醇浸提和氯仿萃取法制备石斛碱，也存在纯度低和使用有毒性溶剂氯仿的问题。

鉴于目前铁皮石斛生物碱提取方法在提取率、纯度和溶剂等方面存在的问题，需要提供一种高效提取铁皮石斛中生物碱的方法。

发明内容

针对现有技术铁皮石斛生物碱提取方法中存在的不足，本发明提供一种高效提取铁皮石斛中生物碱的方法，该方法包括如下步骤：

(1)将新鲜的原料铁皮石斛茎条，清洗干净、干燥，将干燥后的铁皮石斛切成短条；

(2)将切好的铁皮石斛短条与碱试剂混合，在球磨机中球磨至均匀，取出球磨后的粉末，粉末中加入水搅拌溶解；

(3)在步骤(2)所得的溶液中加入纤维素酶和半纤维素酶，进行酶解；

(4)在步骤(3)所得的酶解液中加入氨肽酶和胰酶，进行酶解，酶解结束后，灭酶、冷却、过滤；

(5)在步骤(4)所得的滤渣在加入乙醇和乙酸乙酯混合液，重复浸提、过滤，合并滤液、蒸干，获得生物碱。

进一步地，步骤(1)所述的干燥为将洗净的铁皮石斛置于75-90℃中干燥2-4h，干燥后切成1-2cm的短条。

进一步地，步骤(2)所述的碱试剂为碳酸钙、氢氧化钠、氢氧化钾中的一种或两种以上组合，铁皮石斛与碱试剂质量比为1:0.5-2。

进一步地，步骤(3)所述的纤维素酶和半纤维素酶的质量比为1:0.2-0.6，添加量为铁皮石斛质量的1-5％，反应条件为pH＝4-7，温度为20-50℃，反应时间为1-5h。