[发明专利]一种快速获得羊肚菌分生孢子的培养其及其制备方法

说明书

本发明提供了一种快速获得羊肚菌分生孢子的培养基及其制备方法，该方法包括专用培养基配制、接种、培养和检测等步骤。取单孢、多孢或组织分离获得的羊肚菌(Morchella spp.)母种于普通PDA或CYM培养基上活化为母种，再按常规无菌操作方法，将羊肚菌接种到配方为：0‑20％碳源、0‑20％氮源、0.1‑2％微量元素、琼脂12‑25％、ph5‑8的培养基上，5‑25℃避光培养14‑30天，肉眼检测或显微检测培养结果后，2‑8℃保藏备用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种食用菌无菌培养的无性孢子获得方法，包括培养基配比及培养条件。更具体地，涉及一种快速获得羊肚菌分生孢子的制备方法。

背景技术

羊肚菌(Morchella spp.)是世界著名食、药用菌，具有抗肿瘤、抗氧化、抗菌、降血脂、提高免疫力等功效。近年来，随着人们对绿色健康的追求，羊肚菌受到更多人的推崇，需求量日益增大，野生羊肚菌数量急剧减少，人工栽培羊肚菌日益成为研究重点。2010年，独立营养添加技术的普及和传播使得羊肚菌栽培技术得到长足发展。然而每年仍有近70％的栽培者无法稳定获得收益。主要原因是羊肚菌种性、生活史、营养代谢、生理学等基础生物学研究匮乏。

分生孢子(conidia)是有隔菌丝的真菌中最常见的一类无性孢子，是大多数子囊菌亚门和全部半知菌亚门真菌的无性繁殖方式，主要借助风、水和动物传播。孢子形态、构造、大小、颜色和排列等特征因种而异，是菌种鉴定的重要依据。部分分生孢子可用于育种、保藏和接种扩大等。

羊肚菌分生孢子的最早报道于1904年Molliard所尝试的人工栽培实验中，实验发现在接种的土层表面可以形成大量的白色霉状物。 1982年，Ower的羊肚菌人工栽培实验中也报道有大量的分生孢子，并指出其在土豆培养基上的萌发率小于1％。2005年，Masaphy首次描述了红褐羊肚菌栽培过程中的无性孢子形态。羊肚菌商业化栽培表明：分生孢子(通常称之为“菌霜”)的产生对出菇具有重要指示作用。羊肚菌大田栽培过程中非常容易产生分生孢子(图4)，但目前除祁鹏等(2021)采用灭菌的腐殖土培养基获得少量分生孢子外，尚无羊肚菌母种在其他无菌条件下稳定、快速获得分生孢子的报道。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术中存在的上述不足之处，提供一种羊肚菌分生孢子的纯培养方法。采用本发明的方法可在无菌条件下获得羊肚菌分生孢子，解决了羊肚菌纯培养获得分生孢子难的问题，提供了一种羊肚菌良种选育标准。同时提供一种快速获得羊肚菌分生孢子的培养基，突破了现有羊肚菌纯培养难和培养易污染的局限性，为羊肚菌良种选育提供科学的方法。

本发明的上述目的是通过下述的技术方案实现的：

一种快速获得羊肚菌分生孢子的制备方法，该方法包括专用培养基配制、接种、培养和检测等步骤，取单孢、多孢或组织分离获得的羊肚菌母种于普通PDA或CYM培养基上活化为母种，再常规无菌操作接种到配方为：0-20％碳源、0-20％氮源、0.1-2％微量元素、琼脂12-25％、ph5-8的培养基上，5-25℃避光培养14-30天，肉眼检测或显微检测培养结果后，2-8℃保藏备用。

根据所述的一种快速获得羊肚菌分生孢子的制备方法，其中所述专用培养基配制方法为：0-20％碳源、0-10％氮源、0.5-2％微量元素、琼脂12-25％、水1000ml，pH5-8，121-126℃灭菌15-90min后，常规母种制作方法制成培养基。

根据所述的一种快速获得羊肚菌分生孢子的制备方法，其中所述培养步骤为接种后在5-25度培养14-30天至菌丝全部长满培养皿或试管。

根据所述的一种快速获得羊肚菌分生孢子的制备方法，其中所述碳源为小麦、木屑、棉籽壳、葡萄糖、蔗糖和果糖的中的一种或至少两种的混合物。

根据所述的一种快速获得羊肚菌分生孢子的制备方法，其中所述氮源为酵母粉、蛋白胨、牛肉膏和豆粉的中的一种或至少两种的混合物。