[发明专利]一种鸭坦布苏病毒弱毒株及其制备方法和应用

说明书

本发明中公开了一种鸭坦布苏病毒弱毒株，该弱毒株为鸭坦布苏病毒的基因缺失突变病毒株，其缺失的基因序列包括编码鸭坦布苏病毒的Capsid蛋白氨基酸的核苷酸序列。本发明还提供了上述鸭坦布苏病毒弱毒株的制备方法及在鸭坦布苏病毒疫苗中的应用。本发明中的鸭坦布苏病毒弱毒株通过基因缺失突变，删除了Capsid蛋白氨基酸序列的第20位‑第43位氨基酸，直接影响了vRNA的复制能力，从而使突变病毒致弱，显著降低病毒的毒力；其对雏鸭的单次免疫就能显著激活受感染雏鸭的免疫系统，能为雏鸭提供有效的免疫保护。因此，该突变病毒株可应用于制备预防鸭坦布苏病毒病的疫苗，尤其是应用于制备鸭坦布苏病毒致弱活疫苗。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种鸭坦布苏病毒弱毒株及其制备方法和应用。

背景技术

鸭坦布苏病毒(DTMUV)是能引起蛋鸭产蛋下降综合征，甚至致死性脑炎的一种新型黄病毒。几乎所有品种的鸭都能感染鸭坦布苏病毒，包括樱桃谷鸭、北京鸭、麻鸭等，由于蛋鸭感染后其特征性病变为卵泡膜出血，卵泡变形甚至破裂，所以该病曾被称为“出血性卵巢炎”，导致蛋鸭产蛋量大幅度下降甚至停止产蛋，严重者能够导致死亡，死亡率可以达到10％-30％。剖检时可以见到脾脏明显肿大；另外部分鸭肝脏出血严重，并同时伴有针尖状白色坏死点；卵巢病理变化非常严重，出血、萎缩、破裂，输卵管有大量粘液。此外，有报道鸡、鹅、麻雀等也能感染该病毒。经病原的分离与鉴定确定引起该病的病原为鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus，DTMUV)。

目前对于坦布苏病毒的免疫防治主要还是通过疫苗免疫来进行，现有的坦布苏病毒弱毒活疫苗通常是通过传统的连续传代方式获得，其安全风险较高。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术中存在的鸭坦布苏病毒弱毒活疫苗的有效性和安全性较差的问题，提供一种鸭坦布苏病毒弱毒株，即鸭坦布苏ΔC20-43突变病毒株，该鸭坦布苏ΔC20-43突变病毒株经基因缺失、重组后制备得到，可应用于制备预防鸭坦布苏病毒病的疫苗，尤其是应用于制备鸭坦布苏病毒致弱活疫苗。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：一种鸭坦布苏病毒弱毒株，该弱毒株为鸭坦布苏病毒的基因缺失突变病毒株，其缺失的基因序列包括编码鸭坦布苏病毒的Capsid蛋白氨基酸的核苷酸序列。

优选地，所述弱毒株缺失的基因序列为编码鸭坦布苏病毒的Capsid蛋白第20位-第43位氨基酸的核苷酸序列，所述弱毒株命名为鸭坦布苏ΔC20-43突变病毒株。

Capsid(C)蛋白是黄病毒的最小的结构蛋白，经NS2B3蛋白酶切割后产生的成熟C蛋白只有100氨基酸左右。C蛋白结构与功能在黄病毒属中高度保守，其结构包含4个α螺旋，会通过疏水相互作用、氢键等力形成二聚体。C蛋白最重要的功能是通过二聚体结构结合病毒基因组RNA(vRNA)，形成Nucleocapsid(NC)参与病毒粒子的组装，NC在出芽获得病毒囊膜后形成完整的病毒粒子(Virion)。对黄病毒研究发现，C蛋白能容受较大程度的截短突变仍保持病毒的感染性，但会导致亚病毒颗粒(Subviral particles，SVPs)的产量增加。SVPs不含NC，但是构象和免疫原性与virion十分相似，是良好的免疫原。因此，C蛋白是病毒致弱的理想靶标。本发明中将鸭坦布苏病毒进行基因缺失突变，删除了编码鸭坦布苏病毒Capsid蛋白第20位-第43位氨基酸的核苷酸序列，使Capsid蛋白第20位-第43位氨基酸的缺失，从而直接影响了vRNA的复制能力，这是鸭坦布苏ΔC20-43突变病毒株在体外致弱的主要原因。

本发明提供了上述鸭坦布苏病毒弱毒株的制备方法，包括以下步骤：