[发明专利]一种用于猫冠状病毒的RNA疫苗及其构建方法

说明书

本发明属于RNA疫苗的技术领域，具体涉及一种用于猫冠状病毒的RNA疫苗及其构建方法。所述RNA疫苗为采用含有5’UTR、S蛋白、终止密码子、3’UTR以及polyA核酸的序列合成；所述S蛋白选自FCoV‑I型或FCoV‑II型；所述5’UTR、3’UTR的序列选取自猫源的猫血红蛋白或猫白蛋白，所选序列的同源性在50%~100%；本发明的RNA疫苗能够实现同时诱导细胞免疫和体液免疫，可以做到无细胞生产、且生产时无需导入有毒化学品，能够高效迅速地对付病毒变异，相较传统疫苗，本发明的用于猫冠状病毒的RNA疫苗能够有效地缩短疫苗研发和生产周期，为防控FCoV的爆发提供有效的技术手段。

技术领域

本发明属于RNA疫苗的技术领域，具体涉及一种用于猫冠状病毒的RNA疫苗及其构建方法。

背景技术

猫冠状病毒（Feline coronavirus，FCoV）是家猫和野生猫致死性疾病猫传染性腹膜炎（Feline infectious peritonitis，FIP）的病原，通过口鼻传播，主要感染幼年和老龄猫，在世界猫群中广泛流行。

FCoV病毒有4种主要结构蛋白，分别是刺突蛋白（Spike protein，S）、膜蛋白（Membrane protein，M）、小膜蛋白（Small envelope protein，E）和核衣壳蛋白（Nucleocapsid protein，N）。其中S蛋白是排列在包膜突起的糖蛋白，分子量约为180~200kDa，它对于诱导宿主的抗体应答和细胞免疫很重要。冠状病毒可通过S蛋白与特定的细胞受体结合，是决定病毒致病性和组织嗜性的关键因素，S蛋白是诱导机体产生中和抗体的保护性抗原，目前疫苗的相关研究的也集中在S蛋白区域。

FCoV根据S蛋白氨基酸序列和抗体交叉中和差异分为2种血清型：I型和II型。血清I型是主要流行毒株类型，其S蛋白完全来源于FCoV。血清II型FCoV临床不常见，由犬冠状病毒(Canine coronavirus，CCoV)和FCoV双重重组而来。FCoV-І型在世界范围内广泛流行，在美国和欧洲一些国家，FCoV-І型毒株感染率高达80-95%；在亚洲地区主要流行FCoV-ІІ型，感染率高达25%。血清I型和II型 FCoV毒株均存在2种在抗原和形态学上不同的生物型(或病理型)：猫肠道冠状病毒（Feline enteric coronavirus，FECV）和猫传染性腹膜炎病毒（Feline infectious peritonitis virus，FIPV）。

其中猫肠道冠状病毒（FECV）的感染仅局限于消化道，会引起猫的体温上升，食欲不振甚至脱水等症状，致死率较低。猫传染性腹膜炎病毒，是猫肠道冠状病毒的高毒力突变株，具有高传染性及高致死率的特点。在临床上，猫传染性腹膜炎又可以分为渗出性和非渗出性两种病理型。由于暂无有效治疗药物，携带FIPV的猫咪一旦发病，难以康复，死亡率高。

近年来我国养猫数量逐年增加，由于国内市场并无相关疫苗，猫感染FIP的风险与日俱增。FECV及其转化的FIPV基因型毒株中存在由不同程度的单核苷酸多态性和插入/缺失现象，同时FIP潜伏期几周至几年不等，这种巨大差异给防疫工作带来严峻挑战。目前针对FIPV感染猫的治疗只能起到延缓疾病的作用，不能达到根治的效果，所以疫苗的预防显得尤为重要。

国内外现有疫苗的大都还处于研究阶段，由于该病毒特殊的感染机制，使得常规疫苗和重组疫苗效果不佳。FECV及其转化的FIPV基因型毒株中存在由不同程度的单核苷酸多态性和插入/缺失现象。FECV感染率达80%-95%，而FIP的致死率高达95%，目前并没有有效的疫苗上市，猫一旦感染FIPV几乎只能靠治疗延缓死亡，因此，FCoV疫苗的市场很有潜力，并且对FCoV预防具有重要意义。前期疫苗的研究FIP减毒活疫苗、灭活疫苗和亚单位疫苗免疫猫后均可观察到ADE，使FIP潜伏期缩短至1-2 d，病程更短，死亡更快。随着基因工程技术和分子生物学技术的发展，人们开始把注意力活载体疫苗及核酸疫苗等新型基因工程疫苗上。

发明内容