[发明专利]一种CRISPR_Cas系统免标记核酸检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种CRISPR_Cas系统免标记核酸检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

扩增富集待测样本中的目标核酸得到扩增产物；

RNA聚合酶转录所述扩增产物形成单链RNA；

向导RNA特异性识别并结合单链RNA中的靶标序列，激活CRISPR_Cas系统中Cas蛋白的RNase活性，其附带切割活性能够切割附近的报告RNA，导致其降解，当靶标序列不存在，Cas蛋白无RNase活性，则报告RNA不被降解；

检测报告RNA；

所述报告RNA为大肠杆菌DH5α总RNA；

所述检测为通过Agilent 2100对所述大肠杆菌DH5α总RNA进行检测分析所述报告RNA的完整度。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述CRISPR_Cas系统为CRISPR_Cas13系统。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述RNase选自但不限于LshCas13a、LbaCas13a、LbuCas13a、LwCas13a、AspCas13b、BzoCas13b、CcaCas13b、PauCas13b、PbuCas13b、PgiCas13b、PguCas13b、PigCas13b、PinCas13b、Pin2Cas13b、Pin3Cas13b、PsaCas13b、PsmCas13b、PspCas13b、RanCas13b、AdmCas13d、EsCas13d、RfxCas13d或RspCas13d。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述RNA聚合酶选自但不限于T7 RNA聚合酶、T3 RNA聚合酶或SP6 RNA聚合酶。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述目标核酸为DNA或RNA。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述DNA通过但不限于重组酶聚合酶扩增进行富集；所述RNA通过但不限于逆转录-重组酶聚合酶扩增进行扩增富集。