[发明专利]用于产生嵌合多肽的方法和组合物

权利要求书

1.一种将单链可变片段(scFv)转化至嵌合多肽的方法，所述方法包括：

(a)提供：

i.第一载体，其包含编码包含scFv的第一多肽的第一多核苷酸，所述scFv包含轻链可变结构域、接头区和重链可变结构域，编码所述接头区的所述第一多核苷酸的部分包含第一位点特异性重组基序；

ii.第二载体，其包含第二位点特异性重组基序和编码第二多肽的第二多核苷酸；和

iii.重组酶，其能够使所述第一位点特异性重组基序与所述第二位点特异性重组基序重组，和

(b)用所述重组酶使所述第一载体和所述第二载体重组，从而形成编码包含以下部分的嵌合多肽的重组载体：

i.所述轻链可变结构域或所述重链可变结构域，和

ii.所述第二多肽或其部分；

其中所述嵌合多肽不是scFv。

2.根据权利要求1的方法，其中所述第二载体和/或所述第一载体包含编码至少一种结合部分恒定区的多核苷酸，所述结合部分恒定区例如为CH1、CH2、CH3或CL结构域。

3.根据权利要求2的方法，其中所述第二载体和所述第一载体的每一种都包含编码至少一种结合部分恒定区的多核苷酸，所述结合部分恒定区例如为CH1、CH2、CH3或CL结构域。

4.根据前述任一项权利要求的方法，其中所述嵌合多肽选自IgG、Fab、F(ab')₂和Fab'。

5.根据前述任一项权利要求的方法，其中所述第二载体和/或所述第一载体是质粒或噬菌粒。

6.根据前述任一项权利要求的方法，其中所述第一载体包含彼此相邻定位的多个不同的调节元件，其中所述调节元件之一在第一细胞类型中控制所述第一多肽或其部分的表达，所述调节元件的另一个在第二细胞类型中控制所述第一多肽或其部分的表达。

7.根据前述任一项权利要求的方法，其中当在所述第一细胞类型中表达时所述第一多肽或其部分与蛋白质片段融合，其中所述蛋白质片段优选包含病毒外被蛋白，例如M13gpIII，并且优选另外包含细菌信号肽。

8.根据前述任一项权利要求的方法，其中所述第一多核苷酸含有包含内含子调节元件的内含子，其中所述内含子调节元件在原核细胞中控制所述第一多肽或其部分的表达。

9.一种试剂盒或组合物，其包含：

(a)第一载体，其包含编码包含scFv的第一多肽的第一多核苷酸，所述scFv包含轻链可变结构域、接头区和重链可变结构域，编码所述接头区的所述第一多核苷酸的部分包含第一位点特异性重组基序；

(b)第二载体，其包含第二位点特异性重组基序和编码第二多肽的第二多核苷酸；以及

可选的

(c)重组酶，其能够使所述第一位点特异性重组基序与所述第二位点特异性重组基序重组；

其中所述第一载体和所述第二载体的重组形成重组载体，所述重组载体编码包含以下部分的嵌合多肽：

i.所述轻链可变结构域或所述重链可变结构域，和

ii.所述第二多肽或其部分；

其中所述第一载体和/或所述第二载体包含编码至少一种结合部分恒定区的多核苷酸，所述结合部分恒定区例如为CH1、CH2、CH3或CL结构域。

10.根据权利要求9的试剂盒或组合物，其中所述第二载体和所述第一载体的每一种都包含编码至少一种结合部分恒定区的多核苷酸，所述结合部分恒定区例如为CH1、CH2、CH3或CL结构域。

11.根据权利要求9或10的试剂盒或组合物，其中所述第一载体包含彼此相邻定位的多个不同的调节元件，其中所述调节元件之一在第一细胞类型中控制所述第一多肽或其部分的表达，所述调节元件的另一个在第二细胞类型中控制所述第一多肽或其部分的表达。