[发明专利]一种急性肾损伤至慢性肾脏病的动物模型构建方法

权利要求书

1.一种急性肾损伤至慢性肾脏病的动物模型构建方法，其特征在于包括以下步骤：

步骤一、实验准备，实验器材包括3％戊巴比妥钠、1ml注射器、高压消毒手术器械、胶皮手套、3-0手术缝合线、75％酒精、医用碘伏、生理盐水、无菌棉签、泡沫板手术台；

步骤二、选取20-25g左右小鼠(C57，ICR均可)，术前一晚禁食，不禁水；

步骤三、备好实验器械及耗材，放至实验台，空调调至27摄氏度，电热毯打开，紫外线照台30分钟；

步骤四、3％戊巴比妥钠(50mg/kg)腹腔注射麻醉小鼠，小鼠取俯卧位固定于泡沫板(不易导热保暖性较好)手术台上，背部去毛备皮，碘伏消毒；

步骤五、沿小鼠背部脊椎旁0.5cm、肋骨下缘0.5-1cm处剪开皮肤(U型切口)，并用碘伏消毒，在左右肾脏竖脊肌外侧缘剪开筋膜0.5cm，使用无齿弯镊及无齿弯钳自切口沿竖脊肌外侧缘由浅入深，小心分离竖脊肌与附着其外侧缘的脂肪，即可暴露出两侧肾脏的肾动静脉；用自制血管拉钩小心勾选出两侧肾脏血管并留置拉钩于切口处，持右侧血管拉钩向上轻提右侧肾脏血管并迅速用动脉夹夹闭右侧肾动静脉，左侧肾血管夹闭方式同右侧；肾脏血管夹闭后即可见到双侧肾脏由鲜红变黑紫，镊子整理切口并用碘伏消毒皮肤覆盖创口，生理盐水浸湿纱布后平铺于小鼠背部，使其保持充分水化，防止切口干燥，将小鼠置于电热毯上，维持小鼠术中体温；

步骤六、肾脏血管夹闭50分钟后取小鼠于泡沫板上，先右后左依次松开动脉夹，恢复血流，观察肾脏恢复情况；

步骤七、分两层(皮下筋膜层及皮肤)缝合切口，并注意碘伏消毒；

步骤八、待小鼠清醒后，将其放回洁净笼具并放回饲养室饲养，定期观察小鼠状态及死亡情况并做好记录，术后1-2天为急性肾损伤期，继续饲养1个月以上即可发展至慢性肾脏病阶段。

2.根据权利要求1所述的一种急性肾损伤至慢性肾脏病的动物模型构建方法，其特征在于：所述步骤一的高压消毒手术器械包括剪刀(眼科剪2把，弯剪1把)、止血钳(弯头2把，直头1把)、持针器、手术缝针(圆形缝针1个，三角形缝针1个)、自制拉钩(2只)、镊子(皮镊2把，弯镊1把)。

3.根据权利要求1所述的一种急性肾损伤至慢性肾脏病的动物模型构建方法，其特征在于：所述步骤一中选用的泡沫板不易导热，保暖性较好。

4.根据权利要求1所述的一种急性肾损伤至慢性肾脏病的动物模型构建方法，其特征在于：所述步骤五中背部切口的切割方式可以不必使用U型切口，背部正中单切口或背部脊柱两旁双切口均可。

5.根据权利要求1所述的一种急性肾损伤至慢性肾脏病的动物模型构建方法，其特征在于：所述步骤六中肾脏血管夹闭时间可根据实际实验情况进行选择，范围是35-55分钟。

6.根据权利要求1所述的一种急性肾损伤至慢性肾脏病的动物模型构建方法，其特征在于：所述步骤五中由于右侧肾动静脉较短应先夹闭。

7.根据权利要求1所述的一种急性肾损伤至慢性肾脏病的动物模型构建方法，其特征在于：所述步骤四至步骤七中全程消毒。

8.根据权利要求1所述的一种急性肾损伤至慢性肾脏病的动物模型构建方法，其特征在于：所述步骤五中肾动静脉采用一次性夹闭成功的方式进行操作，避免发生肾脏缺血预适应，影响造模成功。

9.根据权利要求1所述的一种急性肾损伤至慢性肾脏病的动物模型构建方法，其特征在于：所述步骤五中皮肤切口切勿与筋膜切口内外位置重合，皮肤切口宜位于筋膜切口外侧(内侧亦可)，此举可使皮肤覆盖筋膜切口，防止感染的发生。