[发明专利]通过近红外荧光探针标记血栓实现肺栓塞造模及无创定量检测的方法

说明书

本发明涉及一种可结合血栓栓子的近红外荧光探针分子及其在肺栓塞造模和无创定量检测方面的应用。该方法在体外由大鼠血浆、凝血酶、氯化钙与近红外荧光探针分子形成可示踪的血栓栓子，将其剪碎并适度研磨至微米尺度后通过尾静脉注射入小鼠体内。该血栓栓子微粒能在小鼠肺部血管蓄积，进而堵塞血管形成栓塞，实现小鼠肺栓塞模型构建，辅以小动物活体荧光成像系统则可实现无创定量检测，可应用于溶栓药物溶栓效果评价等方面。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种用近红外荧光探针标记的血栓栓子微粒构建小鼠肺栓塞模型及其应用。

背景技术

肺栓塞（Pulmonary embolism, PE）是一种由外源性或内源性栓子阻塞肺动脉或其分支而引起肺循环障碍的心血管急症，严重威胁人类的生命健康。继发于急性PE的右心室衰竭、循环性休克和心脏骤停是导致其高死亡率的原因。近年来，我国的PE患者呈逐年增加的趋势。如能早期诊断并及时治疗，急性PE患者的病死率可由30%下降至8%。急性PE的治疗方案包括抗凝治疗、溶栓治疗、介入治疗及外科治疗等。溶栓疗法是药物直接或间接将非活化状态的血浆蛋白纤溶酶原转变成活化的纤溶酶，纤溶酶作用于纤维蛋白凝块，导致其溶解，同时通过清除和灭活凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅷ，干扰凝血作用，发挥抗凝作用。近年来，众多研究人员致力于新型溶栓药物开发，且多项具有说服力的研究结果为急性PE溶栓治疗提供了循证医学证据。因此，亟待开发一种简单、有效、可重现的标准化肺栓塞模型，用于深入研究肺栓塞的发病分子机理及评价不同溶栓治疗方案的溶栓效率，以减少溶栓药物的出血并发症，使患者受益。

目前，已有几种小鼠PE模型被构建用于模拟人体肺部阻塞性血栓栓塞，如凝血因子诱导的小鼠PE模型、光化学反应诱导的小鼠PE模型和外源性血栓注射诱导的小鼠PE模型。凝血因子诱导的小鼠PE模型具有操作简便、价格低廉等优点，已广泛应用于检测化合物的体内抗血栓作用。然而，凝血因子常导致致死性血栓栓塞，且其诱导形成的肺栓塞的病理生理学过程不同于人体继发于静脉血栓形成的PE。光化学反应诱导的小鼠PE模型利用玫瑰红B在绿色光照射下产生单线态氧自由基，使血管内皮受损、血小板粘附，激发凝血过程，导致辐照区血管内血栓形成。该方法建立的PE模型更接近人体病生理条件下发生的PE，但是形成的血栓多见于肺部微血管，而在肺部大血管中罕见。外源性血栓注射诱导的小鼠PE模型是将体外制备的血凝块通过尾静脉或颈静脉注射入小鼠体内，微栓子或血栓栓子微粒优先滞留于肺部，且分布较为均匀，可在生理条件下自发缓慢溶解，无致死性。

活体动物体内成像技术的飞速发展极大地促进了疾病诊疗以及在活体水平进行药物活性评价，也被用于溶栓药物的评价。活体动物体内成像技术主要分为光学成像（optical imaging）、核素成像（radio-nuclear imaging）、核磁共振成像（magneticresonance imaging, MRI）、超声成像（ultrasound imaging）、计算机断层成像（computedtomography, CT）。随着多层螺旋CT时空分辨率的提高，CT肺动脉成像（computedtomographic pulmonary angiography, CTPA）已替代血管造影检查，成为PE临床诊断的金标准。而光学成像具有操作简便、结果直观、测量快速、灵敏度高、费用低廉等、可多次重复、长时间监测等独特优点，是进行药物研究及筛选上更具优势。

发明内容

本发明的目的在于建立一个经外源性荧光标记血栓诱导的小鼠PE模型，可利用光学成像示踪荧光标记血栓，而用于药物的溶栓效果评价。

肺血栓栓塞症（pulmonary thromboembolism, PTE）是最常见的急性PE类型，由来自静脉系统或右心的血栓阻塞肺动脉或其分支所致，以肺循环和呼吸功能障碍为主要病理生理特征和临床表现，占急性PE的绝大多数，也是静脉血栓栓塞症（venousthromboembolism, VTE）最严重的临床表现，并且很多情况下继发于深静脉血栓（deepvenous thrombosis, DVT）。