[发明专利]HCC组织切片中巨噬细胞包绕肿瘤细胞簇结构及其作为肿瘤标志物的用途和识别方法

说明书

本发明公开了一种HCC组织切片中巨噬细胞包绕肿瘤细胞簇结构及其作为肿瘤标志物的用途和识别方法。所述巨噬细胞包绕肿瘤细胞簇结构为在HCC组织切片中，在HCC细胞簇边缘向外0‑10μm范围内，TAMs个数4个以及TAMs个数与HCC细胞簇中HCC细胞个数的比例大于1:2。MCTC识别方法是以多色免疫荧光技术染色巨噬细胞和肝癌细胞为基础，利用软件识别肿瘤细胞簇边缘，统计HCC细胞簇边缘向外0‑10μm范围内的TAMs个数和HCC细胞簇中HCC细胞的个数，若符合上述条件，确定含有MCTC结构。MCTC结构可作为一个新的肿瘤标志物，有效预测HCC患者的复发，检测MCTC结构可对HCC患者进行预后评估。

技术领域

本发明涉及生物医学技术领域，具体涉及一种HCC组织切片中巨噬细胞包绕肿瘤细胞簇结构及其作为肿瘤标志物的用途和识别方法。

背景技术

肝癌在全球范围内，发病率排在第6位，致死率排在第4位，并且发病率和致死率在近几年内仍处于增高的趋势。肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)占原发性肝癌的75％-85％。手术切除、射频消融、传统中医治疗已被证实能提高HCC患者的生存时间，但接受根治性切除术的HCC患者肝内或肝外转移的发生率较高，肿瘤的复发和转移依然限制了他们的长期生存，因此，探索预测HCC复发转移的标志物十分必要。

肿瘤的转移涉及多个步骤：转移的癌细胞必须侵入周围的基质，进入血管，在循环中存活、停滞、渗出、侵入基质并在转移灶中生长，而同时又要逃避免疫系统的破坏。研究报道，微环境中的成分(如成纤维细胞，内皮细胞或肿瘤浸润的白细胞)可以跟随转移的肿瘤细胞进入循环，并协助肿瘤转移。有证据表明，微环境中基质细胞促进肿瘤细胞的转移依赖于与肿瘤细胞的空间分布：在肺腺癌和外阴鳞状细胞癌的癌组织中观察到，肿瘤相关成纤维细胞与肿瘤细胞间形成异性链接，其中肿瘤相关成纤维细胞充当向导带领着随后的肿瘤细胞，促进肿瘤细胞的集体迁移；在HCC癌组织中观察到两种不同的血管分布模式，一种模式是血管呈不连续的分布，另一种模式是血管呈连续曲线状，形成蛛网状模式，并且包裹肿瘤细胞簇(vessels that encapsulated tumor clusters，VETC)，其中VETC模式可以通过非依赖EMT的方式促进HCC细胞簇转移。但是在肿瘤中，由其他基质细胞，如免疫细胞和肿瘤细胞形成特殊结构的报道还十分罕见。

肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages，TAMs)是HCC组织中最丰富的免疫细胞之一，其特点是具有可塑性和功能的多样性。在胰腺癌、乳腺癌和前列腺癌患者中的外周血中检测到肿瘤相关巨噬细胞样细胞，并且在循环肿瘤微栓子中检测到了TAMs表面标志物的表达，证据表明这些细胞可能起源于肿瘤部位。在HCC组织中，单细胞测序方面的研究显示TAMs在基因表达水平存在高度的异质性，但是这些测序技术破坏了癌组织的空间结构，目前关于TAMs在HCC组织中的空间分布特征及其对HCC患者预后的影响尚无研究报道。

发明内容

本发明为了解决上述技术问题，而提供一种HCC组织切片中巨噬细胞包绕肿瘤细胞簇结构及其作为肿瘤标志物的用途和识别方法。

本发明是按照以下技术方案实现的：

一种HCC组织切片中巨噬细胞包绕肿瘤细胞簇结构，所述巨噬细胞包绕肿瘤细胞簇结构为在HCC组织切片中，在HCC细胞簇边缘向外0-10μm范围内，TAMs个数4个以及TAMs个数与HCC细胞簇中HCC细胞个数的比例大于1:2。

一种上述HCC组织切片中巨噬细胞包绕肿瘤细胞簇结构的识别方法，包括以下步骤：

S1.针对TAMs表面标志CD68和肝癌细胞表面标志物HepPar-1进行免疫荧光染色；

S2.利用软件识别CD68表达阳性和HepPar-1表达阳性的细胞；

S3.利用灰度值差异识别HepPar-1表达阳性的细胞轮廓，找到成簇状分布的HCC细胞，并统计HCC细胞簇中HCC细胞的个数；