[发明专利]混菌发酵生产ε-PL的方法

权利要求书

1.一种混菌发酵生产ε-PL的方法，其特征在于：包括下述步骤：

第一步，配制培养基

a、配制用于孢子制备的BTN琼脂培养基：

葡萄糖 10g/L，蛋白胨 2g/L，酵母提取物 1g/L，琼脂 20 g/L；用1 M NaOH溶液或1 MH₂SO₄调整初始pH值为 7.5备用；

b、配制白色链霉菌种子培养基：

葡萄糖 50g/L；酵母提取物 5g/L；(NH₄)₂SO₄ 10g/L；KH₂PO₄ 1.36g/L；K₂HPO₄·3H₂O0.8g/L；MgSO₄·7 H₂O 0.5g/L；ZnSO₄·7 H₂O 0.04g/L；FeSO₄·7 H₂O 0.0 3g/L；用1 MNaOH溶液或1 M H₂SO₄调整初始pH值为6.8备用；

c、配制谷氨酸棒杆菌种子培养基：

氯化钠5g/L，牛肉膏10g/L，蛋白胨10g/L，葡萄糖20g/L；用1 M NaOH溶液或1 M H₂SO₄调整初始pH值为7.2备用；

d、配制ε-PL发酵培养基：

葡萄糖 60 g/L，(NH₄)₂SO₄ 10 g/L，酵母提取物 10g/L，KH₂PO₄ 4g/L，；MgSO₄·7H₂O0.8g/L，FeSO₄·7 H₂O 0.05g/L；用1 M NaOH溶液或1 M H₂SO₄调整初始pH值为7.4备用；

第二步，制备种子液

制备白色链霉菌种子液：

首先将白色链霉菌孢子粉溶解于白色链霉菌种子培养基中，在200 r/min，30℃摇床条件下培养24 h，然后在超净工作台上将其涂布于BTN琼脂培养基上，置于30℃培养箱中培养5-8天，得到白色链霉菌孢子；

在超净工作台上将得到的白色链霉菌孢子接种于装有白色链霉菌种子培养基的摇瓶中，在200 r/min，30℃摇床条件下培养24 h，得到白色链霉菌种子液备用；

制备谷氨酸棒杆菌种子液：

在超净工作台上将谷氨酸棒杆菌接种于装有谷氨酸棒杆菌种子培养基的摇瓶中，在200 r/min，30℃摇床条件下培养至OD₆₀₀=2.3~2.8之间，得到谷氨酸棒杆菌种子液备用；

第三步，混菌发酵

将制备的白色链霉菌种子液接种于装有ε-PL发酵培养基的培养瓶中，发酵12h，然后将谷氨酸棒杆菌种子液接种进去，在200 r/min，30℃摇床条件下继续发酵60 h，得到成品ε-PL。

2.根据权利要求1所述的混菌发酵生产ε-PL的方法，其特征在于：所述第二步混菌发酵时，白色链霉菌种子液接种量为8%；谷氨酸棒杆菌种子液接种量为10%。