[发明专利]一种检测SARS-COV-2病毒的D614G突变体的试剂及其检测方法

说明书

一种检测SARS‑COV‑2病毒的D614G突变体的试剂及其检测方法，其包括引物组、探针、阴性对照品和阳性对照品，所述引物组包括含有SARS‑CoV‑2病毒3037位点突变序列的正向引物3037‑F和反向引物3037‑R以及含有SARS‑CoV‑2病毒23403突变序列中的正向引物23403‑F和反向引物23403‑R,所述探针包括识别SARS‑CoV‑2病毒3037位点突变序列的探针3037‑probe以及识别SARS‑CoV‑2病毒23403位点突变序列的探针23403‑probe，所述阴性对照品采用灭菌超纯水，所述阳性对照品为含有3037位点突变序列的片段3037‑TEM和含有23403突变序列的片段23403‑TEM的2种DNA片段的混合液。

技术领域

本发明涉及遗传检测领域，具体为一种检测SARS-COV-2病毒的D614G突变体的试剂及其检测方法。

背景技术

自新冠病毒(SARS-CoV-2)疫情全面爆发以来，全球200多个国家新冠肺炎感染人数不断攀升，截至2021年4月8日，新型冠状病毒已经感染超过1.3乙人，累计死亡人数超过280万。

新型冠状病毒是一种单股正链RNA病毒，属冠状病毒科，β冠状病毒属中的Sarbecovirus亚属。其基因组包含11个基因，其中功能较为重要的5个基因分别是：ORF1ab基因编码参与病毒RNA转录和复制的多功能蛋白，包含负责切割多聚蛋白的蛋白酶；S基因编码刺突蛋白S，其通过与宿主受体(ACE2)相互作用感染宿主，其决定病毒的侵染对象和侵染能力；E基因编码囊膜蛋白E，在病毒形态发生和组装中起关键作用，并在宿主细胞膜中通过自我组装，形成允许离子传输的五聚体蛋白-脂质孔，在细胞凋亡的诱导中也起作用；M基因编码膜蛋白，其为病毒囊膜的重要组成成分，通过与其他病毒蛋白的相互作用，在病毒的形态发生和组装中起核心作用；N基因编码核蛋白N，其在病毒装配过程中通过与病毒基因组和膜蛋白M的相互作用而发挥功能，并且在提高病毒基因组转录效率以及病毒复制方面发挥重要作用。

病毒的基因组变异是指其基因组上的碱基顺序发生改变。新型冠状病毒由于其为单链 RNA病毒，更易发生突变，病毒的突变与重组对病毒的侵染能力、繁殖能力和病毒的检测、抗体有效性均密切相关，所以对病毒的突变和重组的监视是研究病毒至关重要的一环。

新冠病毒基因的一个特殊变异使得变异后的病毒株迅速成为了世界主流的病毒株。这个病毒株之所以能取得传播上的优势，是因为变异发生在新冠病毒的S蛋白区域，S蛋白对于新冠病毒来说就是一把开启细胞引发感染的钥匙。研究者认为这种改变可能导致病毒更容易和细胞发生融合，从而增强其传染性，此外还可能会增加“ADE效应”，即已感染过新冠病毒并有抗体的人若感染变异后的新病毒，症状会更加严重。

中国的抗疫工作取得了巨大的成果,导致D614G病毒株在国内传播有效控制,在世界上的比例越来越小,D614G突变病毒株在欧洲和美洲传播过程中没有其他竞争对手,导致了大量传播，同时在中国需要防御境外入境人员携带D641G传入国内，需要有快速的检测手段，而非依赖于昂贵的全基因组测序。

广泛传播的强感染能力的D641G突变体，除了在S蛋白614位点(23403位点的碱基A至G)突变之外，同时伴有nsp3基因的3037位点C至T突变，因此我们开发了23403位点突变和3037位点突变的双阳性检测被认为是D641G突变体阳性。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本发明提供一种检测SARS-COV-2病毒的D614G 突变体的试剂及其检测方法，有效的解决了上述技术背景中提到的问题。