[发明专利]一种针对人CD47的鼠源阻断型抗体及其制备和应用

说明书

本发明公开了一种针对人CD47的鼠源阻断型抗体，其亚型为小鼠IgG1，该抗体重链和轻链可变区氨基酸序列分别如SEQ ID NO：1‑2所示，均由4个框架区和3个互补决定区组成。本发明还公开了该抗体轻、重链可变区的核苷酸序列及含有该序列的嵌合抗体表达载体，轻、重链可变区核苷酸序列分别如SEQ IDNO：3‑4所示。本发明所述的针对人CD47的鼠源阻断型抗体可特异性结合CD47，具有良好的阻断活性及促吞噬功能，在靶向人CD47治疗性抗体开发方面具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于单克隆抗体技术领域，涉及一种针对人CD47的鼠源阻断型抗体及其制备和应用，具体涉及一种针对CD47分子胞外段且可阻断CD47与其配体SIRPα结合的鼠源阻断型性抗体。

背景技术

CD47，也称为整合素相关蛋白，是一种广泛表达于细胞表面的糖蛋白分子。结构上，CD47包含一个IgV样的胞外结构域、5个跨膜区和一个可变剪接的胞质尾。CD47与抑制性受体调节蛋白α(Signal regulatoryproteinα，SIRPα)互为配体和受体，两者可以形成CD47-SIRPα复合物，参与调控多种免疫反应进程。在正常生理条件下，CD47是一个“自我”的标志物，介导“别吃我”信号，在维持机体体内平衡方面具有重要的作用。然而，在多种血液肿瘤和实体肿瘤中，CD47的表达显著升高，且与临床不良预后密切关联。肿瘤细胞通过高表达CD47，强化“别吃我”信号，抑制巨噬细胞等吞噬细胞介导的吞噬作用，从而逃逸免疫系统的监视。使用单克隆抗体或融合蛋白特异性阻断CD47与SIRPα的相互作用，可以解除肿瘤细胞对吞噬细胞的抑制作用，促进其对肿瘤细胞的吞噬清除并最终抑制肿瘤的生长和进展。CD47与阿糖胞苷等化疗药物、适应性免疫检查点抗体(如PD-1/PD-L1抗体)以及针对肿瘤特异性抗原的调理抗体联合使用可以进一步发挥协同抗肿瘤作用，为肿瘤的治疗提供了新的思路，对进一步提高疗效具有重要意义。

杂交瘤抗体制备技术是在体细胞融合技术基础上发展而来的。1975年克勒(Kohler)和米尔斯坦(Milstein)证明，将骨髓瘤细胞与免疫动物的脾细胞融合，形成能分泌针对该抗原的高特异性抗体。从发明至今，虽有大量新的抗体制备技术涌现，杂交瘤技术仍然是当前单克隆抗体制备的主要方式。通过杂交瘤技术制备的单克隆抗体具有亲和力高、特异性强的特点，同时通过该技术得到的候选抗体分子通常具有良好的成药性，为药物的后期开发提供了诸多便利。随着免疫、细胞融合和高通量筛选技术的进步，杂交瘤技术仍然焕发着蓬勃生机。因此，利用杂交瘤技术进行抗体药物开发具有重要的价值。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种针对人CD47胞外段的鼠源阻断型抗体，同时提供了该抗体的编码序列，及含有该编码序列的载体和宿主细胞。

本发明是通过以下技术方案实现的：使用具有生物学活性的高纯度人CD47胞外段蛋白多次免疫BALB/c小鼠，并通过脾脏细胞与SP2/0细胞的融合，杂交瘤细胞筛选与亚克隆化，获得特异性针对人CD47的鼠源阻断型抗体。然后以杂交瘤cDNA为模板，通过PCR扩增及测序分析获得杂交瘤抗体可变区序列。最后使用流式细胞术对克隆获得的可变区序列进行验证。

本发明提供了一种针对人CD47的鼠源阻断型抗体，其具有阻断CD47与SIRPα结合的活性，所述抗体包括轻链可变区和重链可变区。

其中，所述的重链可变区的氨基酸序列和核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1和SEQID NO：3所示，或与SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3具有至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％以上的序列一致性。