[发明专利]Bmf作为细胞凋亡标志物的应用

说明书

本发明涉及细胞凋亡技术领域。本发明提供了Bmf作为细胞凋亡标志物的应用。本申请以体外培养的小尾寒羊卵泡颗粒细胞为模型，通过过表达和干扰实验探索Bmf在颗粒细胞增殖或凋亡过程中的生物学作用及调控机制，为进一步深入研究小尾寒羊颗粒细胞凋亡和卵泡闭锁的分子调控提供理论参考。

技术领域

本发明涉及细胞凋亡技术领域，尤其涉及Bmf作为细胞凋亡标志物的应用。

背景技术

细胞凋亡是许多生物体中调节组织稳态和应激反应的重要过程。哺乳动物卵泡发育过程中，受多种因素的调控，包括激素分泌、生长因子、细胞因子作用、凋亡信号通路的参与等。这些因素作用于卵泡的颗粒细胞层，调节颗粒细胞增殖、分化和凋亡；同时，卵泡颗粒细胞与卵母细胞之间的相互作用对卵泡的整体发育和卵子的质量起到重要的调控作用。因此，颗粒细胞凋亡能够引起卵泡闭锁，研究颗粒细胞生长的分子调控机制，对了解卵泡的发育过程是十分必要的。

BCL-2蛋白家族通过调节线粒体外膜通透性来调控线粒体凋亡途径。BCL-2蛋白家族包括三个功能亚群：(1)抗凋亡蛋白，包括BCL-2、BCL-XL、BCL-W、mcl1和BFL-1/A1；(2)促凋亡执行者，包括BAX、BAK、BOK；(3)促凋亡BH3-only蛋白，包括BAD、BID、BIK、BIM、BMF、HRK、NOXA、PUMA等。其中抗凋亡和成孔蛋白含有多BCL-2同源性(BH)结构域，而促凋亡BH3-only蛋白仅含有BH3结构域，通过灭活抗凋亡BCL-2蛋白，作为凋亡程序的启动因子，促进细胞凋亡。BAX和BAK作为细胞凋亡的效应因子，可介导活化后的MOM通透性增加，从线粒体中释放细胞色素c，从而激活caspases。同时，抗凋亡BCL-2蛋白通过与BH3基元互作，并与抗凋亡蛋白表面的同源沟槽相互作用，结合并抑制Bax/Bak和BH3-only蛋白来发挥促生存功能。

在健康细胞中，Bmf通过与动力蛋白轻链2(DCL2)相结合定位于肌动蛋白V马达。一旦某些凋亡刺激影响肌动蛋白的细胞骨架，如细胞附着丢失，导致Bmf的释放，使其移位并结合促生存BCL-2蛋白。BMF最初被报道为仅bh3蛋白的致敏剂，不能直接激活Bak或Bax，但可以抑制抗凋亡BCL2家族蛋白释放直接激活剂或激活Bak/Bax。然而，后来的研究表明Bmf也可以作为一种活化剂。在缺少有效的直接激活剂(BIM和BID)的情况下，Bmf表现出对Bax或Bak的直接激活，并诱导效应剂介导的细胞色素c的释放和脂质体的通透性。

有研究表明小鼠中敲除BMF将会增加原始卵泡数量，延长雌性小鼠的可孕育年限。BMF能够介导小鼠胚胎期卵巢中卵母细胞的丢失，并限制了卵巢发育过程中生殖细胞的数量，但不影响最初卵巢中原始卵泡的数目。出生后20-50天的小鼠，BMF敲除的卵巢中闭锁卵泡数量少于野生小鼠。因此，BMF对卵巢中卵泡及卵母细胞生长发育具有较为重要的影响。然而，有关BMF对家畜，特别是小尾寒羊卵巢中卵泡的生长发育及颗粒细胞增殖的影响还未见报道。

发明内容

本发明的目的在于提供Bmf作为细胞凋亡标志物的应用，揭示了颗粒细胞凋亡的新机制。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了Bmf作为细胞凋亡标志物的应用。

作为优选，所述细胞为羊颗粒细胞。

本发明提供了Bmf作为细胞凋亡标志物的应用。本申请以体外培养的小尾寒羊卵泡颗粒细胞为模型，通过过表达和干扰实验探索Bmf在颗粒细胞增殖或凋亡过程中的生物学作用及调控机制，为进一步深入研究小尾寒羊颗粒细胞凋亡和卵泡闭锁的分子调控提供理论参考。

附图说明

图1为分离培养的颗粒细胞形态及鉴定；

图2为颗粒细胞HE染色结果；

图3为BMF在细胞中的绿色免疫荧光图；

图4为DAPI染料标记的蓝色DNA分布图；