[发明专利]一种用于检测甲型流感的引物探针组合的恒温扩增试剂盒

说明书

本发明涉及分子生物学领域，具体而言，涉及一种用于检测甲型流感病毒的引物探针组合试剂盒。所述引物探针组合试剂盒包含F3和B3组成的外引物对和FIP和BIP组成的内引物对，以及环引物和探针。本发明提供的试剂盒用于甲型流感病毒病毒RNA检测，具有操作简单、快速、灵敏的特点，为甲型流感病毒病毒的现场快速检测筛查提供有效的技术手段，具有重要意义。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体而言，涉及一种用于检测甲型流感病毒的引物探针组合试剂盒。

背景技术

甲型流感病毒（Influenza A，IFV A）目前可分为16个H亚型（H1-H16）和9个N亚型（N1-N9），目前已有H1、H2、H3、H5、H7和H9等亚型有人感染的报道。由于编码HA和（或）NA的核苷酸序列容易发生突变，致使HA和（或）NA的抗原表位发生改变，这种抗原性的改变使人群原有的特异性免疫力失效，故甲型流感病毒常引起较大规模甚至世界性的流感流行。按照流行特点，造成人间流感流行的流感病毒可区分为季节性流感病毒和新型甲型流感病毒。季节性流感病毒通常在年度间发生小范围的基因变异，这种基因变异会导致微小的抗原性改变，称为抗原漂移（antigenic drift）。因此，季节性流感病毒虽具有年度特异性且抗原性的改变使感染者不易获得持久免疫力，但传播范围通常局限于较小的人群范围，一般不会造成太高的发病率和死亡率，易感人群多为老年人（65岁）和婴幼儿（6岁）。在过去的几十年中，季节性流感病毒主要集中在甲型H3N2和H1N1亚型。近年来，新型甲型流感病毒亚型暴发流行的案例时有发生。例如，2009年新型甲型H1N1流感病毒造成全球性流感大流行；人感染高致病性禽流感（H5亚型）病毒的病例时有报道，禽类甲型H5N1亚型流感病毒被认为具有造成人间大范围流感流行的潜力。新型甲型流感病毒通常由于基因的节段性重组所致，这种大范围的基因改变易导致病毒抗原特性的重大改变，称为抗原转变（antigenicshift）。新型甲型H1N1流感病毒（2009）即同时包含了禽流感、猪流感和人季节性流感的基因片段从而导致病毒在抗原水平发生了明显改变。由于抗原性的明显改变以及可能由此造成的病毒毒力的增强，病毒的传染性和致病严重程度都有所增加，故新型甲型流感病毒可能造成更高的发病率和死亡率。

甲型流感病毒主要经空气飞沫传播，常引起发热、乏力、肌肉酸痛以及轻到中度的呼吸道症状，重者可致肺炎、心肌炎和心衰。常规检测甲型流感主要通过抗原抗体等血清学方法检测或通过qPCR进行核酸实检测；抗原抗体检测对窗口期病人有着检测灵敏度不足等问题，而qPCR有着相对较短的检测周期，且每轮测试可以同时检测多个样本，可以在相对短时间内实现较高通量的样本检查；所以流感病毒核酸检测试剂可用于流感的辅助诊断。但是该法需要依赖于较为复杂的检测流程和相对复杂高价的仪器，同时对于检测环境的要求很高，目前需要在疾控中心、三甲医院等地集中检测，容易面临检测试剂有限、检测仪器和实验人员均超负荷运转等问题，无法广泛普及至广大基层医院、防控现场和家庭。另外用于核酸检测的Sanger测序、NGS方法不单可以准确地确认甲型流感病毒的有无，还可以识别基因组中的突变，对于病毒溯源、分型、流行病学追踪均有重要意义，但检测周期至少需要24小时以上，操作复杂，需要专业技术人员实施，难以满足快速检测及对阳性人员进行快速隔离的要求。由于能在单一温度进行反应，不需要仪器进行复杂得温度变化控制，恒温扩增技术对硬件的要求相比qPCR大大降低。但现有的恒温扩增技术在灵敏度、特异性等方面与qPCR相比仍有一定差距，因此没有得到广泛的推广和应用。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一方面涉及引物探针组合试剂盒，其包含F3和B3组成的外引物对和FIP和BIP组成的内引物对，以及环引物和探针；

F3、B3、FIP、BIP的核苷酸序列依次如SEQ ID NO：1~4所示；

环引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：5~6所示；