[发明专利]一种用于滤纸干血片的检测标志物洗脱液及其应用

说明书

本申请涉及生物试剂的技术领域，具体公开了一种用于滤纸干血片的检测标志物洗脱液及其应用。一种用于滤纸干血片的检测标志物洗脱液包括缓冲体系、内源性碱性磷酸酶抑制剂和非离子型表面活性剂。本申请的洗脱液可用于新生儿疾病筛查试剂，进一步的，可用于洗脱采集有新生儿足跟血的Whatman 903滤纸片上的筛查检测标志物，其具有高洗脱效率、高广谱性和高兼容性的优点。

技术领域

本申请涉及生物试剂的技术领域，更具体地说，它涉及一种用于滤纸干血片的检测标志物洗脱液及其应用。

背景技术

新生儿筛查是指用快速、敏感的实验室方法对新生儿的先天性内分泌异常、遗传代谢病以及某些危害严重的遗传性疾病进行筛查，以期对患病新生儿进行早期诊断、早期治疗，防止其机体组织器官发生不可逆的损伤，从而避免新生儿出现精神发育不可逆损害、智力低下、言语障碍甚至死亡的情况。目前我国新生儿筛查的基本项目包括甲状腺功能低下症和苯丙酮尿症，对应检测的标志物为促甲状腺激素(TSH)和苯丙酮。

随着新生儿疾病筛查技术的发展，目前可进行筛查的病种也越来越多，部分地区相继开展了葡萄糖磷酸脱氢酶缺乏症(检测标志物为G-6-PD酶，即葡萄糖-6-磷酸脱氢酶)、先天性肾上腺皮质增生症(检测标志物为17-α羟基孕酮)、半乳糖血症(检测标志物为半乳糖)、氨基酸代谢病(检测标志物为酪氨酸)和假肥大型肌营养不良(包括杜氏肌营养不良DMD和贝克肌营养不良BMD，检测标志物均为CKMM，即肌酸激酶同工酶)等疾病的筛查工作。上述检测标志物均可通过进行血液样本采集获得，然后通过使用现有的化学发光、时间分辨荧光、酶联免疫、放免以及液相质谱法等多种用于新生儿疾病筛查的方法，对采集得到的血液样本中存在的检测标志物分别进行检测，即可得到新生儿疾病筛查的结果。

但是，新生儿或低龄儿并不适合采用静脉采血的方式进行检测样本取样，因此目前通常使用滤血片对新生儿或低龄儿进行采血。滤血片是一种非常有效的血样采集方式，并且具备良好的稳定性。通常新生儿疾病筛查都是采集足跟血第二滴血，将血液样本滴到Whatman 903滤纸上并在室温干燥后进行保存和运输。在对滤血片上的标志物进行检测前，需要先使用特定的洗脱剂将标志物溶解，并从滤血片上洗脱下来，最后才进行相关分析。

其中，TSH、G-6-PD酶和CKMM等蛋白质类的检测标志物对有机溶剂、强酸和强碱比较敏感，在洗脱过程中容易发生变性和失活的情况，而苯丙酮、17-α羟基孕酮、半乳糖和酪氨酸等有机小分子类的检测标志物具有较强的疏水性，往往需要有机溶剂的参与以帮助其溶解。因此，当需要对同一滤血片样本上的含有的蛋白质类检测标志物和有机小分子类检测标志物进行洗脱时，往往需要将滤血片样本分为多份后，对每一份滤血片样本采用对应的洗脱剂进行洗脱以得到对应的检测标志物。显然，这种操作不仅繁琐复杂，严重降低了检测效率，且容易污染滤血片，导致检测准确度下降。此外，若滤血片上的血斑数量不足，采用该方法显然无法满足检测所有标志物的需求，从而导致检测失败。

发明内容

为了解决上述问题，本申请提供一种用于滤纸干血片的检测标志物洗脱液及其应用，其具有高广谱性、高兼容性和高洗脱效率的优点，能同时高效地洗脱蛋白质类检测标志物和有机小分子类检测标志物，并能兼容多种标志物检测方法。

第一方面，本申请提供一种用于滤纸干血片的检测标志物洗脱液，采用如下的技术方案：

一种用于滤纸干血片的检测标志物洗脱液，包含缓冲体系、内源性碱性磷酸酶抑制剂和高分子非离子型表面活性剂。

缓冲体系一方面作为特异性阻断剂和洗脱剂的溶剂，另一方面用于维持溶液体系的pH平衡和盐平衡，防止溶液体系内的蛋白质发生变性、失活。缓冲体系可以是PBS、PB和Tris-HCl溶液等在生物化学领域中常用的缓冲溶液，但凡具有缓冲溶液体系pH平衡或盐平衡功能的溶液，应视为落入本发明所申请的保护范围内。