[发明专利]基于多重荧光定量PCR技术的新冠病毒突变序列检测技术及其应用

权利要求书

1.一种用于检测新冠病毒核酸S基因突变类型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括以下任一种或几种引物和探针，其中每组中的引物都包含正向引物和反向引物，每个所述探针的两端分别标记有荧光报告基团/荧光淬灭基团：

a.用于检测S基因突变类型：序列位置23403，序列变化AG的引物和探针；其中正向引物的核苷酸序列如：SEQ ID No.1所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，其中探针的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；

b.用于检测S基因突变类型：序列位置23063，序列变化AT的引物和探针；其中正向引物的核苷酸序列如：SEQ ID No.5所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示，其中探针的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；

c.用于检测S基因突变类型：序列位置22812-22813，序列变化AGGA的引物和探针；其中正向引物的核苷酸序列如：SEQ ID No.9所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.10所示，其中探针的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示；

d.用于检测S基因突变类型：序列位置23012，序列变化GA的引物和探针；其中正向引物的核苷酸序列如：SEQ ID No.5所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示，其中探针的核苷酸序列如SEQ ID No.13所示。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光报告基团/荧光淬灭基团选自选自FAM、VIC或HEX、ROX、NED、CY3或CY5荧光报告基团BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcy1、Tamra和Quencher基团且试剂盒中各个所述探针上荧光报告基团互不相同。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括以下组分中的任一种或几种：PCR反应液、酶混合液、阳性对照、阴性对照。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液包括缓冲液、MgCl₂、dUTP和dNTPs；所述酶混合液包括Taq酶、反转录酶和UNG酶。

5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照为含有部分新冠病毒的基因序列的假病毒或含有新冠病毒突变序列的假病毒。

6.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述阴性对照为无菌水。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括用于检测内参基因的探针。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述探针包括核苷酸序列如SEQ IDNo.4、SEQ ID No.8、SEQ ID No.12、SEQ ID No.14所示的多核苷酸中的任一种或几种。

9.如权利要求1-8任一项所述试剂盒用于检测以下任一种或几种新冠病毒核酸S基因突变类型中的用途：a,S基因突变类型：序列位置23403，序列变化AG；b.S基因突变类型：序列位置23063，序列变化AT；c.S基因突变类型：序列位置22812-22813，序列变化AGGA；d.S基因突变类型：序列位置23012，序列变化GA。

10.如权利要求1-8任一项所述试剂盒在制备检测以下任一种或几种新冠病毒核酸S基因突变类型的产品中的用途：a.S基因突变类型：序列位置23403，序列变化AG；b.S基因突变类型：序列位置23063，序列变化AT；c.S基因突变类型：序列位置22812-22813，序列变化AGGA；d.S基因突变类型：序列位置23012，序列变化GA。