[发明专利]具有神经元保护功能的富硒蛹虫草活性硒肽及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了具有神经元保护功能的富硒蛹虫草活性硒肽及其制备方法和应用。具有神经元保护功能的富硒蛹虫草活性硒肽，氨基酸序列为Val‑Pro‑Arg‑Lys‑Leu‑(Se)Met或Arg‑Tyr‑Asn‑Ala‑(Se)Met‑Asn‑Asp‑Tyr‑Thr。本发明的富硒蛹虫草活性硒肽结构清楚，可以人工化学合成制得，也可以通过对富硒蛹虫草蛋白酶解液进行分离纯化获得。同时，本发明的富硒蛹虫草活性硒肽对H₂O₂诱导氧化损伤细胞具有预保护作用，可在H₂O₂诱导氧化损伤细胞中有效降低过度ROS的积累和提高抗氧化酶(CAT和SOD)的活力，在缓解神经退行性疾病的功效上极具潜力。

技术领域：

本发明属于活性肽领域，具体涉及具有神经元保护功能的富硒蛹虫草活性硒肽及其制备方法和应用。

背景技术：

机体需要通过活性氧(reactive oxygen species，ROS)作用以维持体内的抗氧化防御系统，从而维持机体恒定的氧化还原状态，保证机体的内环境稳定。当机体的氧化还原平衡状态偏向氧化时，会引起氧化还原信号和控制的中断，以及分子损伤，称为氧化应激(oxidative stress，OS)，进而产生多种疾病。其中，脑部的氧化应激损伤神经元细胞可以引发多种神经退行性疾病，包括阿尔兹海默症、帕金森症和多发性硬化症等。这些疾病明显的影响着人们的生活质量，并给社会带来巨大的经济负担。

研究表明，神经元损伤和神经退行性疾病之间关系密切，对氧化损伤神经元具有保护作用的抗氧化剂可以缓解神经退行性疾病。食品源硒肽是一种天然抗氧化剂。硒肽同相似多肽相比，它兼具硒和多肽的多种生化功能，有更优越的神经元保护活性和抗氧化活性。硒肽的多种生物活性(如抗氧化、抗高血压、抗炎和免疫调节作用)在生物机体内参与各种生物过程。进一步研究结果显示硒肽通过抗氧化途径可有效干预阿尔兹海默症和衰老等进程的发展。硒肽可作为氧化剂清除神经元细胞中ROS的过度累积，还可提高神经元细胞的抗氧化酶系防御系统。因此，硒肽在通过保护氧化损伤神经元途径进而预防或治疗与年龄相关的神经退行性疾病中极具潜力。

目前硒肽主要来源于硒蛋白的酶促水解。根据硒与蛋白结合方式可分为有机硒和无机硒，有机硒相较于无机硒毒性低、生物利用率高且具有更好的抗氧化活性。通过生物强化方式获得的植物可将无机硒转化为有机硒，主要以硒蛋白的形式存在。前期实验结果表明蛹虫草具有强的硒积累能力，硒含量高达117.7mg/kg。因此，富硒蛹虫草中硒蛋白含量高，是一种极好的硒蛋白来源，可用于食源性硒肽的制备。

PC12细胞系来源于大鼠肾上腺髓质的嗜铬细胞瘤，通过体外神经生长因子(NGF)处理，可分化成具有许多类似于交感神经元特性的细胞，因此被广泛应用于神经元氧化损伤相关的神经退行性疾病的研究。已有许多的研究报道了高浓度的H₂O₂可引起细胞的氧化应激损伤，通常作为体外神经元氧化损伤发生的研究。因此，从富硒蛹虫草中制备生物活性硒肽，可通过H₂O₂诱导氧化损伤的PC12细胞模型筛选具有神经元保护作用的硒肽。

发明内容：

本发明的第一个目的在于提供两个具有神经元保护功能的富硒蛹虫草活性硒肽，其氨基酸序列为Val-Pro-Arg-Lys-Leu-(Se)Met和Arg-Tyr-Asn-Ala-(Se)Met-Asn-Asp-Tyr-Thr。

本发明的第二个目的在于提供上述富硒蛹虫草活性硒肽在制备保护神经元细胞的药物中的应用。

本发明的第三个目的是提供一种保护神经元细胞的药物，其含有上述富硒蛹虫草活性硒肽作为活性成分。