[发明专利]一种纤维蛋白溶解酶及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种纤维蛋白溶解酶在制备溶栓药物和/或抗凝药物中的应用，其特征在于，所述的纤维蛋白溶解酶的氨基酸序列为SEQ ID NO.1，所述的纤维蛋白溶解酶包括前导肽和成熟肽两部分。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的纤维蛋白溶解酶的核苷酸编码序列为SEQ ID NO.2。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的纤维蛋白溶解酶的制备方法包括以下步骤：

（1）根据SEQ ID NO.2的序列进行包含前导肽和成熟肽部分扩增引物设计并合成引物；

（2）提取蛹虫草RNA并进行反转录获得cDNA；

（3）以步骤（2）cDNA为模板，使用步骤（1）得到的引物进行扩增；

（4）将步骤（3）得到的扩增产物插入表达载体后转染细胞；

（5）对步骤（4）获得的细胞进行培养，培养物分离纯化后即可获得纤维蛋白溶解酶。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的步骤（5）中的分离纯化包括以下步骤：

A、培养得到的细胞超声破碎提取机进行破壁，离心取上清，4℃，10000rpm离心20min；

B、镍柱亲和层析纯化得到纤维蛋白溶解酶：上样预先平衡好的5mL的Ni-NTA柱，流速5mL/min；

C、上样结束继续冲洗20个柱体积，之后利用洗脱缓冲液线性洗脱10个柱体积；利用自动收集器进行收集，根据出峰位置进行酶活检测及电泳检测。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的步骤（4）中的表达载体为原核表达载体或真核表达载体；所述的转染用细胞为DH5α、HEK293或293T。

6.一种生物学载体在制备溶栓药物和/或抗凝药物中的应用，其特征在于，所述的生物学载体为表达载体，所述的表达载体中包括权利要求2中所述的核苷酸编码序列；所述的生物学载体为细胞，所述的细胞中包括前述表达载体。

7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物为注射液，所述的注射液中纤维蛋白溶解酶的含量为0.15mg/mL-0.45mg/mL。