[发明专利]一种快速专一检测甲型流感病毒的试剂盒及其使用方法

说明书

本发明涉及一种快速专一检测甲型流感病毒核酸的试剂盒及其使用方法，属于生物技术领域。该试剂盒包括工作标准品、恒温扩增反应液和阴性对照品，工作标准品包括甲型流感病毒特异保守序列的阳性对照质粒，特异保守序列为SEQ ID No.1；恒温扩增反应液中包括6条引物：引物F3，其序列为SEQ ID No.2；引物B3，其序列为SEQ ID No.3；引物FIP，其序列为SEQ ID No.4；引物BIP，其序列为SEQ ID No.5；引物LB，其序列为SEQ ID No.6；引物LF，其序列为SEQ ID No.7；阴性对照品为健康人的鼻咽拭子核酸提取液。本发明所提供的甲型流感病毒核酸恒温扩增检测试剂盒具有很好的一致性，且准确度高、操作快速、方法简便。

技术领域

本发明涉及分子生物学检测技术领域，具体涉及一种快速、专一检测甲型流感病毒核酸的试剂盒及其使用方法。

背景技术

流感病毒属正粘病毒科(Orthomyxoviridae)，病毒颗粒呈球状，直径为80nm-120nm，为单股负链RNA病毒，基因组约为13.6kb，由大小不等的8个独立片段组成。流感病毒按照核蛋白和基质蛋白的不同可分为甲、乙、丙三型。甲型流感病毒抗原性易发生变异，多次引起世界性大流行；乙型流感病毒对人类致病性较低；丙型流感病毒只引起人类不明显的或轻微的上呼吸道感染，很少造成流行。

由于特异性高和敏感性好，分子诊断技术被广泛用于流感病毒的检测，特别是在临床实验室中。由于病毒RNA在临床样品中是极微量的。因此，在许多分子诊断测定中，病毒核酸的提取、扩增和分析通常是必不可少的，在分子检测过程中，引物的设计对于检测的特异性和灵敏度有重要作用。聚合酶链式反应即PCR技术为分子扩增的一种常用方法，但PCR技术对硬件设备要求很高，仪器通常比较昂贵，且扩增速度慢，因此环介导的恒温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)应运而生。环介导的恒温扩增技术是一种新的核酸扩增技术，它具有快速简单以及特异性强的特点，能够有望替代传统PCR方法对微生物的检测。因此，我们针对甲型流感病毒核酸的一段特异基因序列，发明了一种试剂盒，它能够快速特异的检测甲型流感病毒。

发明内容

本发明提供一种快速专一检测甲型流感病毒核酸的试剂盒及其使用方法，其能够实时的对患者鼻咽拭子等样本中的甲型流感病毒进行快速精准检测。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种快速专一检测甲型流感病毒核酸的试剂盒，其包括工作标准品、恒温扩增反应液和阴性对照品，

所述工作标准品包括甲型流感病毒的特异保守序列的阳性对照质粒，所述特异保守序列为SEQ ID No.1；

所述恒温扩增反应液中包括6条引物：引物F3，其序列为SEQ ID No.2；引物B3，其序列为SEQ ID No.3；引物FIP，其序列为SEQ ID No.4；引物BIP，其序列为SEQ ID No.5；引物LB，其序列为SEQ ID No.6；引物LF，其序列为SEQ ID No.7；

所述阴性对照品为健康人的鼻咽拭子核酸提取液。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以有如下更进一步的具体选择。

具体的，所述阳性对照质粒由甲型流感病毒基因特异保守序列对应的合成片段克隆至pGEM-T载体中构建而成，其浓度为10⁴copies/μL。