[发明专利]一种快速专一检测2019新型冠状病毒的试剂盒及其使用方法

说明书

本发明涉及一种快速、专一检测2019新型冠状病毒(2019‑nCoV)核酸的试剂盒及其使用方法，属于生物技术领域。该试剂盒包括工作标准品、恒温扩增反应液和阴性对照品，工作标准品包括2019新型冠状病毒(2019‑nCoV)特异保守序列的阳性对照质粒，特异保守序列为SEQ ID No.1；恒温扩增反应液中包括6条引物：外引物F3，其序列为SEQ ID No.2；外引物B3，其序列为SEQ ID No.3；内引物FIP，其序列为SEQ ID No.4；内引物BIP，其序列为SEQ ID No.5；环引物LB，其序列为SEQ ID No.6；环引物LF，其序列为SEQ ID No.7。阴性对照品为健康人的鼻咽拭子核酸提取液。本发明所提供的2019新型冠状病毒(2019‑nCoV)核酸恒温扩增检测试剂盒具有很好的一致性，且准确度高、操作快速、方法简便。

技术领域

本发明涉及分子生物学检测技术领域，具体涉及一种快速、专一检测 2019新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸的试剂盒及其使用方法。

背景技术

2019新型冠状病毒(2019-nCoV)属冠状病毒科(Orthomyxoviridae)，病毒颗粒呈球状或椭圆状，具有多形性，直径为60nm-140nm，为带包膜的单股正链RNA病毒，基因组约为30kb，两端为非编码区，中间为非结构蛋白编码区和结构蛋白编码区。非结构蛋白编码区主要包括ORF1a和ORF1b 基因，结构蛋白编码区主要编码刺突蛋白、包膜蛋白、膜蛋白和核衣壳蛋白。目前已知的可以感染人的冠状病毒有7种，其中2019新型冠状病毒 (2019-nCoV)引发新型冠状病毒肺炎，SARS-CoV引发重症急性呼吸综合征， MERS-CoV引发中东呼吸综合征。2019新型冠状病毒(2019-nCoV)抗原变异性非常高，正在世界范围内大流行。

由于特异性高和敏感性好，分子诊断技术被广泛用于病毒的检测，特别是在临床实验室中。由于病毒RNA在临床样品中是极微量的。因此，在许多分子诊断测定中，病毒核酸的提取、扩增和分析通常是必不可少的，在分子检测过程中，引物的设计对于检测的特异性和灵敏度有重要作用。聚合酶链式反应即PCR技术为分子扩增的一种常用方法，但PCR技术对硬件设备要求很高，仪器通常比较昂贵，且扩增速度慢，因此环介导的恒温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)应运而生。环介导的恒温扩增技术是一种新的核酸扩增技术，它具有快速简单以及特异性强的特点，能够有望替代传统PCR方法对微生物的检测。因此，我们针对2019新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸的一段特异基因序列，发明了一种试剂盒，它能够快速、特异地检测2019新型冠状病毒(2019-nCoV)。

发明内容

本发明提供一种快速、专一检测2019新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸的试剂盒及其使用方法，其能够实时的对患者口咽/鼻咽拭子等样本中的 2019新型冠状病毒(2019-nCoV)进行快速精准检测。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种快速、专一检测2019 新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸的试剂盒，其包括工作标准品、恒温扩增反应液和阴性对照品，

所述工作标准品包括2019新型冠状病毒(2019-nCoV)的特异保守序列的阳性对照质粒，所述特异保守序列为SEQ ID No.1。

所述恒温扩增反应液中包括6条引物：外引物F3，其序列为SEQ ID No.2；外引物B3，其序列为SEQ ID No.3；内引物FIP，其序列为SEQ ID No.4；内引物BIP，其序列为SEQ IDNo.5；环引物LB，其序列为SEQ ID No.6；环引物LF，其序列为SEQ ID No.7。

所述阴性对照品为健康人的鼻咽拭子核酸提取液。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以有如下更进一步的具体选择。