[发明专利]一种用于电化学发光检测的磁珠改性标记方法

权利要求书

1.一种用于电化学发光检测的磁珠改性标记方法，其特征在于：包括如下步骤：

1）将带有反应基团A的磁珠与化合物L1和封闭基团MSK先后或同时反应得处理后的磁珠；封闭基团MSK带有极性不带电的基团，含有保护基PG或不含保护基PG；

2）将带有与化合物L1反应的标记物L2-Lable与步骤1）处理后的磁珠进行标记反应，得到表面封闭的标记磁珠；其中L2与L1反应，Lable为想要标记到磁珠上的分子；

当封闭基团MSK含有保护基PG时，所述保护基PG在标记反应之前或之后进行，得到最终用于电化学发光检测的标记磁珠；

当反应基团A为氨基时，具体步骤为：

1）将羟基被保护基PG保护的羟基酸活化酯和带有反应基团X的酸的活化酯，与氨基磁珠表面的氨基通过成酰胺键反应，将氨基磁珠表面的氨基完全反应掉形成改性氨基磁珠（I）；

2）将改性氨基磁珠（I）进行脱羟基保护基PG游离出羟基，得到表面是部分羟基和部分反应基团X的磁珠（II）；

3）将被反应基团Y修饰的蛋白质分子链霉亲和素SA与磁珠表面的X基团进行标记反应得到用于电化学发光检测的磁珠；所述反应基团Y与反应基团X能够形成化学键；

所述带有反应基团X的酸的活化酯是4-戊炔酸的丁二酰亚胺活化酯。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述保护基PG是叔丁氧羰基、苄氧羰基、苄基、三氟甲酰基、苯甲酰基、芴氧羰基、烯丙氧羰基、甲氧羰基、乙氧羰基、乙酰基、特戊酰基、甲氧甲基或4,4'-二甲氧基三苯基甲基中任意一种。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1）中羟基被保护基PG保护的羟基酸活化酯和带有反应基团X的酸的活化酯中，羟基被保护基PG保护的羟基酸活化酯是由羟基被保护基PG保护的羟基酸与酯的活化剂形成，带有反应基团X的酸的活化酯是由带有反应基团X的酸与酯的活化剂形成。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述羟基被保护基PG保护的羟基酸活化酯是5位被4,4'-二甲氧基三苯基甲基保护的羟基戊酸的丁二酰亚胺活化酯。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述反应基团Y修饰的蛋白质分子链霉亲和素SA为叠氮修饰的蛋白质分子链霉亲和素SA。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述叠氮修饰的蛋白质分子链霉亲和素SA的制备方法包括如下步骤：将5-叠氮戊酸置于反应管中，加入二环己基碳二亚胺（DCC）、 N-羟基丁二酰亚胺（HOSu）和 DMF；室温下反应后得到5-叠氮戊酸的N-羟基丁二酰亚胺酯的DMF溶液；将1毫克的链霉亲和素（SA）配置为水溶液，加入制备得到5-叠氮戊酸活化酯的DMF溶液，震荡4-12小时后，经过Sephadex G-25脱盐柱纯化得到叠氮修饰的蛋白质分子链霉亲和素SA。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：5位被4,4'-二甲氧基三苯基甲基保护的羟基戊酸的丁二酰亚胺活化酯和4-戊炔酸的丁二酰亚胺活化酯是将4,4'-二甲氧基三苯基甲基保护的羟基戊酸和4-戊炔酸与N-羟基丁二酰亚胺在缩合剂的作用下一锅法制备而成，其中4,4'-二甲氧基三苯基甲基保护的羟基戊酸和4-戊炔酸的摩尔比为1:0.1-5.0。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：4,4'-二甲氧基三苯基甲基保护的羟基戊酸和4-戊炔酸的摩尔比为3:1。