[发明专利]未成熟卵母细胞体外培养液及其应用

说明书

本发明提供未成熟卵母细胞体外培养液及其应用，属于胚胎培养领域。本发明未成熟卵母细胞体外培养液，是在商品化IVM液中添加辅酶Q10后所得。本发明还提供辅酶Q10在IVM培养中的应用以及含有辅酶Q10用于促进高龄患者未成熟卵成熟、改善卵母细胞质量的药物。采用本发明提供的体外培养液或方法，得到的卵母细胞成熟率较高，质量较好，发育潜能高。

技术领域

本发明属于胚胎培养领域，具体来说是涉及未成熟卵母细胞体外培养液及其应用。

背景技术

近些年来，胚胎移植技术已在动物引种和改良方面广泛应用，已成为体外受精、嵌合体、转基因和克隆动物实现的应用技术。在体外受精、转基因、克隆以及试管婴儿等胚胎生物技术中，经常会涉及到未成熟卵母细胞体外成熟培养 (IVM)。现有未成熟卵IVM培养，大多在基础培养液中添加激素类、血清类及生长因子类(EGF)等。但是，体外培养的卵母细胞与体内成熟的卵母细胞，在成熟率和卵母细胞质量上都存在较大差异，与促排卵周期体内成熟卵母细胞相比， IVM周期的妊娠率明显降低，这主要归因于IVM周期卵母细胞成熟率较低，形成的卵母细胞质量较差，发育潜能低，在高龄患者更是如此。

因此如何提高未成熟卵体外培养成熟率一直是胚胎培养领域的关注焦点。

发明内容

针对上述技术问题，本发明提供辅酶Q10在IVM培养中的应用，采用该方法得到的卵母细胞成熟率较高，质量较好，发育潜能高。

本发明还提供未成熟卵母细胞体外培养液，采用该培养液培养时，卵母细胞成熟率较高，质量较好，发育潜能高。

本发明的目的采用如下技术方案实现。

本发明提供辅酶Q10在IVM培养中的应用。

本发明还提供用于促进高龄患者未成熟卵成熟、改善卵母细胞质量的药物，含有辅酶Q10。

本发明还提供未成熟卵母细胞体外培养液，是在商品化IVM液中添加辅酶 Q10后所得。

优选的技术方案中，所述体外培养液中辅酶Q10的浓度为40-60μM。

优选的技术方案中，所述未成熟卵母细胞体外培养液还含有0.06-0.08IU/ml 的FSH、0.06--0.08IU/ml的LH。

优选的技术方案中，辅酶Q10采用无水乙醇配制成5-15mM的溶液，然后添加至商品化IVM液中。

本发明还提供一种IVM培养未成熟卵的方法，包括采用所述未成熟卵母细胞体外培养液在37℃、6％CO₂、5％O₂和饱和湿度条件下，培养未成熟卵24-48 小时的步骤。

优选的技术方案中，所述未成熟卵母细胞来源于人类。

在本发明中，所述未成熟卵母细胞来源于大于或等于38岁的女性。

在本发明中使用的辅酶Q10可以通过多种方式获得，例如可以通过烟叶中分离提纯获得或者通过辅酶Q10转基因的微生物发酵提取。

本发明的有益效果在于：本发明提供辅酶Q10在IVM培养中的应用，采用该方法得到的卵母细胞成熟率较高，质量较好，发育潜能高。采用本发明提供的未成熟卵母细胞体外培养液，培养高龄患者未成熟卵24-48小时后，所得卵母细胞成熟率较高，降低非整倍体率，从而改善卵母细胞质量并延缓卵母细胞老化，因此卵母细胞的发育潜能高，从而提高妊娠率。

附图说明

图1为未成熟卵母细胞体外培养、卵母细胞线粒体功能检测、极体染色体分析的流程图。

图2为高龄患者GV期卵母细胞体外培养后成熟率图，纵坐标为成熟率，1 为对照组小皿，2为实验组小皿。其中“*”，表示与对照组小皿中成熟率相比， p0.05。