[发明专利]软骨细胞的无血清培养方法、及无血清培养基

说明书

【解决课题】本发明提供一种人软骨细胞的无血清培养方法、无血清培养基。【解决方案】本发明提供一种软骨细胞的无血清培养方法，包括：用蛋白分解酶处理含人软骨细胞的组织的酶处理工序；在酶处理工序之后，用前述蛋白分解酶的抑制剂处理前述组织的抑制剂处理工序；以及在抑制剂处理工序之后，用含有卡托吉宁Kartogenin或SAG中的任一者或两者、以及ITS、FGF2和氢化可的松的无血清培养基培养前述组织的培养工序。本发明提供一种用于培养软骨细胞的无血清培养基，含有卡托吉宁或SAG中的任一者或两者、以及ITS、FGF2和氢化可的松。

本申请是申请日为2016年11月8日、申请号为201580024032.8、发明名称为“软骨细胞的无血清培养方法、及无血清培养基”的申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及在进行无血清培养之前用蛋白分解酶处理细胞的软骨细胞的培养方法及适用于该方法的无血清培养基。

背景技术

日本特开2003-125787号公报中，公开了软骨细胞分化培养中所使用的无血清培养基及使用了该无血清培养基的软骨细胞的培养方法。

日本特许第3638614号公报中，公开了软骨细胞培养基和使用了该培养基的软骨细胞的培养方法。此外，该文献中公开了ITS。

日本特表2002-529071号公报中，公开了用于软骨细胞样细胞的无血清培养基。

日本特表2009-540826号公报中，公开了一种软骨细胞的培养方法，其为：从关节软骨活检中单独分离原代人软骨细胞，用蛋白酶(灰色链霉菌)进行1小时的酶消化，然后，用胶原酶进行酶消化。该文献中，为了从软骨剥离软骨细胞而使用胶原酶。若胶原酶过度作用，则对细胞造成损害。因此，如果在胶原酶附着于细胞的状态下进行无血清培养，则除了不能良好地培养软骨细胞以外，所得到的软骨细胞有时不能应用于移植等。

日本特表2015-522590公报的段落[0145]中，记载了卡托吉宁即Kartogenin是一种有助于治疗骨关节炎的小分子。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2003-125787号公报

专利文献2：日本特许第3638614号公报

专利文献3：日本特表2002-529071号公报

专利文献4：日本特表2009-540826号公报

专利文献5：日本特表2015-522590公报

发明内容

发明要解决的问题

上述培养方法中，虽然培养了软骨，但当实际要对培养的软骨进行移植等时，有时不能得到良好的结果。

在此，本发明的目的在于提供一种能够有效地进行培养、此外还能够得到良好的移植结果的软骨细胞的无血清培养方法，能够用于该方法的无血清培养基。

解决问题的方案

本发明的第一方面涉及用于培养软骨细胞的无血清培养基。该培养基含有卡托吉宁或者SMO激动剂的SAG中的任一者或两者、以及ITS、FGF2和氢化可的松。

优选地，该培养基含有卡托吉宁和SAG这两者。

优选地，该培养基进一步含有IGF(胰岛素样生长因子)。

优选地，该培养基进一步含有作为培养对象的软骨细胞。

优选地，该培养基的优选利用方式为包括该培养基、以及抗坏血酸剂和脂肪酸剂的培养基试剂盒，抗坏血酸剂包括抗坏血酸、抗坏血酸的盐或抗坏血酸的溶剂化物，脂肪酸剂包括脂肪酸、脂肪酸的盐或脂肪酸的溶剂化物。