[发明专利]一种有机磷农药活菌降解剂及其制备方法在审

申请号：	202110485430.7	申请日：	2021-04-30
公开（公告）号：	CN113355267A	公开（公告）日：	2021-09-07
发明（设计）人：	余姝侨;陈红;黄锦泉;吴晓琳	申请（专利权）人：	深圳技师学院（深圳高级技工学校）
主分类号：	C12N1/21	分类号：	C12N1/21;C12N15/70;C09K17/14;C12R1/19
代理公司：	深圳市科吉华烽知识产权事务所(普通合伙) 44248	代理人：	覃迎峰
地址：	518000 广东省深圳***	国省代码：	广东;44
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摘要：
搜索关键词：	一种有机磷农药降解及其制备方法
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【权利要求书】：

1.一种有机磷农药活菌降解剂，其特征在于：其采用pLEV1-TorA-mpd质粒转化到大肠杆菌中扩增培养得到，所述pLEV1-TorA-mpd质粒的序列如SEQ ID NO.1所示。

2.如权利要求1所述的有机磷农药活菌降解剂的制备方法，其特征在于：其包括如下步骤：

步骤S11，构建生产有机磷水解酶的表达载体；

步骤S12，将启动子bba_J23116、光敏融合蛋白 LEV1和两个大肠埃希氏菌终止子rrnB插入到所述光控基因表达载体的RI 和II 酶切位点，获得pLEV1质粒；

步骤S13，将pColE启动子、甲基对硫磷水解酶基因mpd和转移信号肽，插入到pLEV1质粒中的KpnI 和Bglll的酶切位点中，获得pLEV1-TorA-mpd质粒；

步骤S14，将pLEV1-TorA-mpd转化到大肠杆菌菌株中进行扩增培养，得到有机磷农药活菌降解剂。

3.根据权利要求2所述的有机磷农药活菌降解剂的制备方法，其特征在于：步骤S11中，所述生产有机磷水解酶的表达载体的骨架为pCDFDuet1，所述表达载体不含启动子和 MCS序列。

4.根据权利要求2所述的有机磷农药活菌降解剂的制备方法，其特征在于：步骤S13中，所述大肠埃希氏菌终止子rrnB从pBAD/His 载体获得；所述甲基对硫磷水解酶基因mpd从假单胞菌WBC-3中获得；所述转移信号肽为TorA。

5.根据权利要求2所述的有机磷农药活菌降解剂的制备方法，其特征在于：步骤S14中，所述大肠杆菌菌株为BL21菌株。

6. 一种有机磷农药活菌降解剂，其特征在于：其采用pLEV1-TorA-mpd-supernova质粒转化到大肠杆菌中扩增培养得到，所述pLEV1-TorA-mpd-supernova为在pLEV1-TorA-mpd质粒上引入自杀基因supernova得到，所述质粒pLEV1-TorA-mpd-supernova的序列如SEQ IDNO.2所示。

7.如权利要求6所述的有机磷农药活菌降解剂的制备方法，其特征在于：其包括如下步骤：

步骤S21，构建生产有机磷水解酶的光控基因表达载体；

步骤S22，将组成型启动子、光敏融合蛋白 LEV1和两个大肠埃希氏菌终止子rrnB插入到所述光控基因表达载体的RI 和II 酶切位点，获得 pLEV1质粒；

步骤S23，将pColE启动子、甲基对硫磷水解酶基因mpd和转移信号肽，插入到pLEV1质粒中的KpnI 和Bglll的酶切位点中，获得pLEV1-TorA-mpd质粒；在pLEV1-TorA-mpd质粒上引入自杀基因supernova，得到质粒pLEV1-TorA-mpd-supernova；

步骤S24，将质粒pLEV1-TorA-mpd-supernova转化到大肠杆菌菌株中，37℃黑暗扩增培养，得到有机磷农药活菌降解剂。

8.根据权利要求7所述的有机磷农药活菌降解剂的制备方法，其特征在于：步骤S21中，所述生产有机磷水解酶的表达载体的骨架为pCDFDuet1，所述表达载体不含启动子和 MCS序列。

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