[发明专利]一种冻存液组合物、冻存液及类器官冻存方法

权利要求书

1.一种类器官冻存液，其特征在于：按照终浓度的组成包括：低级脂肪醇，10-50% v/v；低聚异麦芽糖，0.01-0.5 g/ml；白蛋白，0.01-0.2g/ml；ROCK抑制剂，0.1-10μM；原代细胞抗生素，0.2-20mg/ml；溶剂为Advanced DMEM/F12培养基；所述低级脂肪醇包括乙二醇、丙二醇、丙三醇中的至少一种；所述ROCK抑制剂包括Y-27632 dihydrochloride、Thiazovivin、SB-772077B dihydrochloride、Y-33075、K-115、Azaindole1中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的一种类器官冻存液，其特征在于：所述类器官冻存液按照终浓度的组成包括：乙二醇，15-40% v/v；低聚异麦芽糖，0.05-0.2 g/ml；白蛋白，0.02-0.1g/ml；Y-33075，0.1-5μM；Primocin，0.5-5mg/ml；溶剂为Advanced DMEM/F12培养基。

3.根据权利要求1或2所述的一种类器官冻存液，其特征在于：所述类器官冻存液还包括：海藻糖、不含维生素A的B27和儿茶素中的至少一种。

4.根据权利要求3所述的一种类器官冻存液，其特征在于：所述类器官冻存液的制备方法包括：按照终浓度的组成配料，将所有组分用Advanced DMEM/F12溶解，即得。

5.一种类器官冻存方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1：将培养得到的类器官去掉原培养基后加入细胞回收液反应5-10min；

步骤2：在体系中进一步加入无菌Hank’s平衡盐溶液混匀，离心后保留沉淀；

步骤3：在沉淀中加入权利要求1~4任意一项所述的类器官冻存液后程序性降温，先将温度降至2-8℃放置4-12h，再降至-20℃放置8-24h，最后于-80℃或液氮中存储。