[发明专利]一种定点偶联抗体与效应分子的方法及其桥接分子

说明书

本发明公开了一种定点偶联抗体与效应分子的方法及其桥接分子。本发明提供的桥接分子主要由抗体结合部(修饰有活化基团的分子A；分子A能与抗体Fc段特异性结合；活化基团能使分子A与抗体Fc段共价连接)和效应分子结合部(带有linker的分子B：分子B能与效应分子结合，linker能与抗体结合部中的分子A连接；或，不带linker的分子B：分子B能与效应分子结合，也能与抗体结合部中的分子A连接)组成。本发明桥接分子具如下优点：特异性，即与抗体Fc段结合，不影响抗体识别结合抗原。通用性，即与含有Fc结构的各类型抗体均具偶联能力。不可逆性，即抗体‑桥接分子‑效应分子复合物形成后不可解离或极难解离，稳定性强，非特异性背景低。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种定点偶联抗体与效应分子的方法及其桥接分子。

背景技术

抗原-抗体特异性识别反应是以抗体为基础的检测试剂和治疗药物的分子生物学基础。在结构上，抗体分为可特异性结合抗原上的抗原决定簇的Fab片段和结构较为稳定的Fc片段，其中，Fc区域结构相对稳定，不参与抗原结合，是抗体标记的主要目标区域。标记抗体是一类重要的生物技术，通过连接在抗体上的效应分子，例如荧光分子，过氧化物酶，核酸序列，细胞毒性药物，来显示抗原供体的位置分布，表达水平，或者达到杀灭携带抗原分子细胞的目的。

定点偶联效应分子与抗体一直是生物学的难点和热点。传统方法一般采取随机交联的方式，即利用效应分子自带或外源性构造的活泼基团如NHS，aldehyde，Maleimide与抗体上活性氨基酸残基如-NH₂或-SH共价交联。由于这些氨基酸残基在抗体上随机分布，不同的抗体采用此种方法偶联效率差异很大。重要的是，若效应分子被交联在了抗体可变区，则可能破坏抗体与抗原的结合能力，造成偶联物失活。

定点偶联技术克服了上述不足。定点偶联技术一般选择Fc区域的某些特有基团进行修饰，但现有技术存在缺陷。例如，Glycosis糖基化技术即利用置换抗体的Fc区糖基引入活性基团，从而实现与效应分子特异性交联，但该方法成本高昂，不适用于大规模制备标记抗体。TUBULIS的抗体-药物偶联物则是利用还原剂处理的抗体在铰链区含有相对丰富的巯基，从而与药物实现偶联，但该种方法对抗体结构有一定的破坏危害，可能造成抗体稳定性下降，结合力降低。

发明内容

本发明的目的是提供一种定点偶联抗体与效应分子的方法及其桥接分子。

第一方面，本发明要求保护一种用于定点偶联抗体与效应分子的桥接分子。

本发明所要求保护的用于定点偶联抗体与效应分子的桥接分子，主要由如下两个部分组成：

(1)抗体结合部：为修饰有活化基团的分子A；所述分子A能够与抗体Fc段特异性结合；所述活化基团能够使得所述分子A与抗体Fc段共价连接；

(2)效应分子结合部：为带有或不带有linker的分子B；所述分子B能够与效应分子结合；当带有所述linker时，所述linker用于与所述抗体结合部中的所述分子A连接；当不带有所述linker时，所述分子B能够与所述抗体结合部中的所述分子A连接。

进一步地，在所述(1)中，所述活化基团与所述分子A之间共价连接。

进一步地，所述(2)中，所述分子B与效应分子之间的结合可为共价连接，也可为非共价连接，如生物素-链霉亲和素或抗体-核酸适配体或抗体-二抗结合。

进一步地，所述(2)中，当带有所述linker时，所述linker用于与所述抗体结合部中的所述分子A连接，这里的连接优选为共价连接，也可为非共价连接。在本发明的具体实施方式中，为共价连接。当不带有所述linker时，所述分子B与所述抗体结合部中的所述分子A连接，优选为共价连接，也可为非共价连接。