[发明专利]一种用于检测浸润性乳腺癌中EphA2 DNA甲基化的方法及用途

说明书

本发明涉及生物医药技术领域，具体公开了一种用于检测浸润性乳腺癌中EphA2DNA甲基化的方法，具体通过提取组织全基因组DNA，并甲基化修饰全基因组DNA，然后利用一对外引物和两对内引物进行nMS‑PCR扩增检测。本发明中检测浸润性乳腺癌中EphA2DNA甲基化的方法能够检测到组织中EphA2DNA甲基化的水平，从而判断浸润性乳腺癌的发病情况。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种用于检测浸润性乳腺癌中EphA2DNA甲基化的方法及用途。

背景技术

乳腺癌作为女性患癌率最高的恶性肿瘤之一，目前全球诊断的乳腺癌患者约1700万人，每年有100万左右的人死于该病。研究发现炎症反应参与了乳腺癌疾病的发生发展，在乳腺疾病的早期乳腺小体会发生炎症改变，但具体机制尚不清楚。乳腺癌是包括肺癌和结肠癌在内的最常见三大癌症之一，近些年随着我国临床筛查水平的提高和人们生活水平的改变，乳腺癌的发病率呈逐年上升趋势。虽然现在可以通过二代基因测序分析肿瘤标志物和病理活检筛查早期乳腺癌，但是由于乳腺癌的分型复杂、症状多样和预后较差，目前尚无积极有效的乳腺癌治疗方法。在乳腺结节形成过程中，炎症反应扮演了重要角色；研究发现在早期乳腺疾病发生前，乳腺结节会首先发生炎症改变，最终导致乳腺癌的发生。

促红素人肝细胞受体酪氨酸激酶A2(EphA2)是一种广泛表达在肿瘤细胞上的跨膜蛋白，主要作用于细胞生长、炎症细胞转移、细胞排斥和粘附等信号传导方面。哺乳动物的Ephrin受体根据其跨模结构域分为A类和B类，包括9个EphA(EphA1-8和EphA10)和五个EphB受体(EphB1-4和EphB6)。其中EphA2是最初是在1990年被发现的由976个氨基酸组成的跨膜糖蛋白；正常条件下，EphA2可以与邻近细胞上的ephrin A1配体相互作用，调节炎症反应和内皮细胞活化。越来越多的证据表明EphA2在食道癌、乳腺癌、肺癌和卵巢癌等肿瘤的恶化和进展中发挥作用。检测患者乳腺组织中EphA2表达，可以帮助我们分析和诊断乳腺癌的进展和病理类型。但是仅仅通过检测EphA2的表达还不能准确的诊断浸润性乳腺癌的病况，也无法分析EphA2在浸润性乳腺癌中的具体作用。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种用于检测浸润性乳腺癌中EphA2DNA甲基化的方法，。

本发明提供了一种用于检测浸润性乳腺癌中EphA2 DNA甲基化的方法，包括：提取待检测组织的全基因组DNA，并甲基化修饰全基因组DNA，先利用一对外引物进行nMS-PCR扩增，然后以获得的产物作为模板，分别利用两对内引物进行扩增，通过计算获得甲基化水平。

进一步地，一对外引物的上游引物如SEQ ID NO.1所示，下游引物如SEQ ID NO.2所示。

进一步地，两对内引物包括甲基化引物和非甲基化引物；

所述甲基化引物的上游引物序列如SEQ ID NO.3所示，甲基化引物的下游引物序列如SEQ ID NO.4所示；

所述非甲基化引物的上游引物序列如SEQ ID NO.5所示，非甲基化引物的下游引物序列如SEQ ID NO.6所示。

进一步地，所述甲基化水平的计算方式为：

甲基化水平＝甲基化OD值/(甲基化OD值+非甲基化OD值)。

本发明还提供了所述的EphA2基因在制备治疗乳腺癌药物中的用途。

本发明还提供了所述的EphA2基因的表达产物在制备治疗乳腺癌药物中的用途。

进一步地，所述乳腺癌为浸润性乳腺癌。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：