[发明专利]一种检测乙肝外泌体miRNA的电化学传感器及其制备与应用

权利要求书

1.一种检测乙肝外泌体miRNA的电化学传感器，其特征在于，包括工作电极、靶物质T链诱导的级联链置换反应体系、MOF/DNA级联酶放大检测体系，所述工作电极为表面固定有捕获探针的基底电极，所述捕获探针为巯基标记的DNA纳米支架，针对外泌体miRNA扩增产物设计；所述级联链置换反应体系包括级联T型结构复合物Ts、级联反应辅助链Fs，所述MOF/DNA级联酶放大检测体系包括MOF/DNA级联酶；所述Ts由DNA单链P链、R链、L链和L₀链组成，所述Fs由DNA单链F链、L₀链组成；所述Ts的末端设有两个立足点T1、T2，靶物质可与第一个立足点T1结合，并通过立足点介导的链置换反应取代P链，暴露位于L链中的第二个立足点T2；Fs与T2杂交，通过碱基配对的延伸置换出靶物质和R链，同时产生DNA纳米支架，置换出的靶物质结合到相邻的立足点T1，触发下一个循环反应，产生大量的DNA纳米支架；DNA纳米支架固定在电极表面，与MOF/DNA级联酶特异性杂交，捕获MOF/DNA级联酶，形成三层复合材料，产生电化学信号，通过检测电化学信号实现外泌体miRNA的检测。

2.根据权利要求1所述的电化学传感器，其特征在于：所述P链的核苷酸序列为：

5'- TTTTTCCCTTAGCTTATCAGACTGA-3'（SEQ ID NO.1）；

所述R链的核苷酸序列为：

5'- CCTACGTCTCCAACTAACTTACGG-3'（SEQ ID NO.2）；

所述L链的核苷酸序列为：

5'-GTAGAATGCAGTGTAGTAGAATGCAGTGTAGTAGAATGCAGTGTAGTAGAATGCAGTGTAGTAGAATGCAGTGTA -3'（SEQ ID NO.3）；

所述L₀链的核苷酸序列为：

5'-TCAACATCAGTCTGATAAGCTAAGGGCCGTAAGTTAGTTGGAGACGTAGGTTTACACTGCATTCTAC-3'（SEQ ID NO.4）；

所述F链的核苷酸序列为：

5'- CCTACGTCTCCAACTAACTTACGGCCCTTAGCTTATCAGACTGA -3'（SEQ ID NO.5）；

所述靶物质T链（靶序列T）的核苷酸序列为：

5'- TAGCTTATCAGACTGATGTTGA -3'（SEQ ID NO.6）。

3.根据权利要求1所述的电化学传感器，其特征在于：所述MOF/DNA级联酶由类葡萄糖氧化酶活性的AuNPs/MOF、具有过氧化物酶样活性的氯化血红素/G-四链DNAzyme结合而成，所述AuNPs/MOF由金纳米粒子AuNPs 和金属有机框架材料MOF结合而成，所述氯化血红素/G-四链DNAzyme是由G-四链体与氯化血红素形成的复合物。

4.根据权利要求1所述的电化学传感器，其特征在于：所述基底电极为金电极；所述电化学传感器还包括参比电极和对电极。

5.根据权利要求1-4任一项所述的电化学传感器的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）制备级联链置换反应体系：采用DNA单链P链、R链、L链和L0链经一步退火法制得级联T型结构复合物Ts，采用DNA单链F链和L0链经一步退火法制得级联反应辅助链Fs；将Ts、Fs、靶物质T链与DNA杂交液混合，孵育，得级联链置换反应体系；

（2）制备MOF/DNA级联酶：采用金纳米粒子AuNPs 和金属有机框架材料MOF结合制得AuNPs/MOF，然后采用AuNPs/MOF与氯化血红素/G-四链DNAzyme 结合制得MOF/DNA级联酶；

（3）将步骤（1）所得的级联链置换反应体系滴加至固定有捕获探针的工作电极表面，孵育；

（4）然后将步骤（2）所得MOF/DNA级联酶与DNA杂交液混合反应，再将得到的反应液滴加到经步骤（3）处理后的工作电极上，孵育，得MOF/DNA级联酶放大检测体系。