[发明专利]基于微针的睾丸组织体外培养方法及其应用

权利要求书

1.一种体外培养睾丸组织促进精原干细胞增殖的方法，所述方法非治疗方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

培养体系的建立：将PEGDA微针浸泡于培养基中进行置换，得到含有经置换的PEGDA微针和培养基的培养体系；

睾丸组织的培养：将离体睾丸组织添加至培养体系中进行培养，使得离体睾丸组织内的精原干细胞增殖；

所述培养基为能够支持睾丸组织培养以及能够支持精原干细胞增殖的培养基；

所述睾丸组织为完整睾丸组织；

所述PEGDA微针为使用体积分数20～70％的PEGDA制备而得的PEGDA微针；

所述培养体系中，培养基的含量为到达PEGDA微针高度的三分之一到三分之二。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述浸泡为：于温度为4～37℃的条件下浸泡至少12h。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述培养基为完全睾丸培养基或SSC培养基。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述完全睾丸培养基的成分包含：占完全睾丸培养基总体积80～90％的αMEM、占完全睾丸培养基总体积5～10％的血清替代物、10～50ng/mL的胶质细胞源性神经营养因子、10～50ng/mL的碱性成纤维细胞生长因子、10～50ng/mL的表皮生长因子、50～100ng/mL的转化生长因子β家族激活素A、10～50ng/mL的干细胞生长因子、10～50ng/mL的骨形态发生蛋白、10～50mM的睾酮、100～200ng/mL的促卵泡激素(FSH)和50～100mg/mL的垂体提取物。

5.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述SSC培养基的成分包含：占SSC培养基总体积85～95％的StemPRO34、占SSC培养基总体积1～5％的胎牛血清、3～7mg/mL的牛血清白蛋白、10～50ng/mL的胶质细胞源性神经营养因子、10～50ng/mL的碱性成纤维细胞生长因子、10～50ng/mL的表皮生长因子、50～100ng/mL的胰岛素、10～200μg/mL的转铁蛋白、10～50nM的亚硒酸盐、10～100μM的腐胺、10～100ng/mL的雌激素、10～100ng/mL的孕激素、1～20mg/mL的D-葡萄糖、1～30μg/mL的生物素、1～50mM的抗坏血酸、1～200mM的维他命MEM、1～50mM DL-乳酸钠、1～100μMβ-巯基乙醇、1～200mM的丙酮酸钠、1～200mM的非必须氨基酸和1～10mM的L-谷氨酰胺。

6.如权利要求1～5任一项所述的方法，其特征在于，所述培养的条件为：于温度为32～37℃、二氧化碳的体积浓度为5～6％的环境中培养2～30d。

7.PEGDA微针在促进精原干细胞增殖方面的应用，所述应用非疾病的诊断和治疗方面的应用，其特征在于，所述应用包括如下步骤：

培养体系的建立：将PEGDA微针浸泡于培养基中进行置换，得到含有经置换的PEGDA微针和培养基的培养体系；

睾丸组织的培养：将离体睾丸组织添加至培养体系中进行培养，使得离体睾丸组织内的精原干细胞增殖；

所述培养基为能够支持睾丸组织培养以及能够支持精原干细胞增殖的培养基；

所述睾丸组织为完整睾丸组织；

所述PEGDA微针为使用体积分数20～70％的PEGDA制备而得的PEGDA微针；

所述培养体系中，培养基的含量为到达PEGDA微针高度的三分之一到三分之二。